| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-18页 |
| ·人体肠道菌群概述 | 第9-10页 |
| ·现有肠道菌检测方案概述 | 第10-13页 |
| ·传统计数法 | 第10页 |
| ·分子生物学定量分析法 | 第10-13页 |
| ·本研究技术背景简介 | 第13-14页 |
| ·竞争性PCR(competitive PCR,cPCR) | 第13页 |
| ·连接酶检测反应(ligase detection reaction,LDR) | 第13-14页 |
| ·本课题的思路及技术路线 | 第14-18页 |
| ·技术问题 | 第14页 |
| ·研究思路 | 第14-15页 |
| ·肠道菌检测分型定量理论基础 | 第15-16页 |
| ·技术路线 | 第16-18页 |
| 第2章 材料和方法 | 第18-32页 |
| ·材料 | 第18-20页 |
| ·标准菌株和粪便样本 | 第18页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第18-20页 |
| ·相关软件 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-32页 |
| ·引物、探针设计 | 第20-21页 |
| ·粪便样本DNA提取 | 第21页 |
| ·标准菌的培养 | 第21页 |
| ·标准菌株DNA抽提 | 第21-22页 |
| ·标准品制备 | 第22-26页 |
| ·内参制备 | 第26页 |
| ·标准曲线的制作 | 第26-27页 |
| ·标准品DNA和样本DNA的通用引物扩增 | 第27页 |
| ·连接反应(LDR) | 第27-30页 |
| ·ABI Prism 377型核酸分析仪操作流程 | 第30页 |
| ·灵敏度检测 | 第30-32页 |
| 第3章 结果 | 第32-55页 |
| ·标准品验证 | 第32-34页 |
| ·含插入目的片段白斑的特异菌落PCR | 第32页 |
| ·特异PCR产物测序和结果比对 | 第32-33页 |
| ·含目的16s rDNA插入片段质粒DNA的抽提 | 第33-34页 |
| ·通用引物对标准品的扩增 | 第34-35页 |
| ·探针特异性验证 | 第35-39页 |
| ·标准曲线分析 | 第39-44页 |
| ·样本检测结果 | 第44-50页 |
| ·检出率分析 | 第44页 |
| ·定量分析 | 第44-50页 |
| ·灵敏度试验结果 | 第50-55页 |
| 第4章 讨论 | 第55-58页 |
| ·通用引物的扩增 | 第55页 |
| ·模板序列对扩增的影响 | 第55-56页 |
| ·LCR探针和LDR探针对信号放大的影响 | 第56页 |
| ·样本检测 | 第56-58页 |
| 第5章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61页 |