| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-13页 |
| 2 材料和方法 | 第13-26页 |
| ·菌种与玉米品种 | 第13页 |
| ·供试培养基 | 第13页 |
| ·供试药品及主要试剂 | 第13页 |
| ·主要仪器 | 第13-14页 |
| ·玉米大斑病菌CnB基因的克隆 | 第14-17页 |
| ·引物设计 | 第14页 |
| ·大斑病菌基因组DNA及总RNA提取 | 第14页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第14-15页 |
| ·玉米大斑病菌CnB基因DNA和cDNA同源片段的获得 | 第15页 |
| ·DNA片段的纯化 | 第15-16页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体的连接 | 第16页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第16页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第16页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第16-17页 |
| ·RACE技术获得CnB基因全长 | 第17-20页 |
| ·5'RACE扩增 | 第17-18页 |
| ·3'RACE扩增 | 第18-19页 |
| ·基因的拼结和全长cDNA的获得 | 第19-20页 |
| ·基因DNA全长的获得 | 第20-21页 |
| ·CnB基因DNA全长的获得 | 第20页 |
| ·Genomic Walking技术获得CnB基因上游启动子序列 | 第20-21页 |
| ·基因的拷贝数分析 | 第21-22页 |
| ·玉米大斑病菌CnB基因正义、反义表达载体的构建 | 第22-24页 |
| ·玉米大斑病菌总RNA的提取第一链cDNA的合成 | 第22-23页 |
| ·CnB基因片段的扩增 | 第23页 |
| ·pSOI载体的酶切验证 | 第23页 |
| ·连接 | 第23-24页 |
| ·转化 | 第24页 |
| ·正义、反义表达载体的验证 | 第24页 |
| ·玉米大斑病菌(正义反义)遗传转化及转化子的筛选 | 第24-25页 |
| ·原生质体的制备 | 第24-25页 |
| ·反义诱导表达载体的遗传转化及转化子的筛选 | 第25页 |
| ·反义转化子DNA的提取 | 第25页 |
| ·反义表达突变体的PCR确认 | 第25页 |
| ·玉米大斑病菌CnB基因反义转化子的形态特征 | 第25-26页 |
| ·突变菌株生长速度的测定 | 第25页 |
| ·突变菌菌落形态的观察 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-42页 |
| ·基因组DNA和总RNA的提取及cDNA的合成 | 第26页 |
| ·CnB基因同源片段的获得 | 第26-27页 |
| ·大斑病菌CnB基因简并引物的设计及同源片段的扩增 | 第26页 |
| ·PCR产物的纯化、克隆、测序 | 第26-27页 |
| ·CnB基因全长序列的获得 | 第27-32页 |
| ·RACE技术获得CnB基因的cDNA全长 | 第27-28页 |
| ·CnB基因的拼接和全长基因的获得 | 第28-29页 |
| ·蛋白的保守结构域分析 | 第29-30页 |
| ·蛋白的二级结构预测和三级结构同源建模 | 第30-31页 |
| ·蛋白的同源性分析 | 第31-32页 |
| ·玉米大斑病菌CnB基因DNA全长和启动子序列的获得 | 第32-34页 |
| ·CnB基因DNA全长和结构分析 | 第32-33页 |
| ·Genome Walking技术获得CnB基因启动子序列 | 第33-34页 |
| ·Southern杂交 | 第34-35页 |
| ·探针的制备 | 第34-35页 |
| ·Southern杂交 | 第35页 |
| ·玉米大斑病菌CnB基因正义、反义表达载体的构建 | 第35-39页 |
| ·诱导表达载体的构建策略 | 第35-36页 |
| ·基因开放阅读框(ORF)的扩增 | 第36页 |
| ·pSOI质粒的酶切 | 第36-37页 |
| ·正义、反义诱导表达载体的验证 | 第37-38页 |
| ·新构建载体的保存 | 第38-39页 |
| ·玉米大斑病菌CnB基因正义、反义遗传转化及转化子的筛选 | 第39-40页 |
| ·原生质体的制备与再生验证 | 第39页 |
| ·原生质体的转化和转化子的筛选 | 第39页 |
| ·反义转化子DNA的提取 | 第39-40页 |
| ·反义表达突变体的PCR确认 | 第40页 |
| ·CnB基因反义抑制突变体的表型分析 | 第40-42页 |
| ·突变菌株生长速度的测定 | 第40-41页 |
| ·菌落形态观察 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-46页 |
| ·利用蛋白质的保守性氨基酸序列进行同源基因克隆 | 第42页 |
| ·RACE技术获得基因cDNA全长 | 第42-43页 |
| ·Genomic Walking技术获得已知基因片段的侧翼序列 | 第43页 |
| ·CnB基因结构及其蛋白的可能功能 | 第43-44页 |
| ·关于反义抑制技术 | 第44-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第52-53页 |
| 作者简历 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 附发表论文 | 第55-59页 |
