| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1 铁素营养研究进展 | 第9-14页 |
| ·机理Ⅰ植物铁吸收机制及相关基因 | 第10-14页 |
| ·Fe(Ⅱ)-转运蛋白基因——IRT基因 | 第10-13页 |
| ·信号肽和可变区的研究进展 | 第13-14页 |
| ·其他相关基因 | 第14页 |
| 2 异源互补法在研究基因功能中的应用 | 第14-17页 |
| ·酵母突变体的异源功能互补法原理 | 第15页 |
| ·酵母突变体异源功能互补法的应用及研究进展 | 第15-17页 |
| 3 进行亚细胞定位和动力学研究的方法 | 第17-21页 |
| ·报告基因 | 第17-19页 |
| ·苯乙烯类染料的原理及应用 | 第19-20页 |
| ·BFA的研究和应用 | 第20-21页 |
| 4 本实验研究基础及技术路线 | 第21-23页 |
| ·研究基础 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 材料和方法 | 第23-34页 |
| 1 材料和试剂 | 第23-28页 |
| ·菌株材料 | 第23页 |
| ·植物材料 | 第23-24页 |
| ·所用载体及引物 | 第24-25页 |
| ·酶、抗生素、各类试剂及试剂盒 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·常用溶液和特殊药品配制 | 第26-27页 |
| ·主要实验仪器 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-34页 |
| ·MxIRT1基因突变的克隆及鉴定 | 第28-30页 |
| ·MxIRT1基因的功能验证 | 第30-34页 |
| 第三章 结果分析 | 第34-62页 |
| 1 去终止子、信号肽、可变区的克隆及表达载体构建 | 第34-39页 |
| ·去除MxIRT1基因中的终止子 | 第34-35页 |
| ·去除MxIRT1基因前端的信号肽序列 | 第35-36页 |
| ·Sal Ⅰ/Not Ⅰ双酶切去除MxIRT1中的可变区 | 第36页 |
| ·将一系列MxIRT1构建到酵母表达载体pDBLeu | 第36-37页 |
| ·构建好的pDBLeu载体转化不同酵母菌株 | 第37-38页 |
| ·构建酵母表达载体pDR196系列的检测 | 第38-39页 |
| ·构建好的pDR196载体转化不同酵母菌株 | 第39页 |
| 2 MxIRT1的功能验证 | 第39-50页 |
| ·对重金属离子Cd、Co、Ni的转运结合能力验证 | 第39-43页 |
| ·转基因M3的异源互补功能验证及Cu~(2+)吸收含量的测定 | 第43-45页 |
| ·转基因smf1的异源互补功能验证及Mn~(2+)吸收含量的测定 | 第45-47页 |
| ·转基因Zrt1Zrt2的异源互补功能验证及Zn~(2+)吸收含量的测定 | 第47-49页 |
| ·转基因DEY1453的异源互补功能验证及Fe~(2+)吸收含量的测定 | 第49-50页 |
| 3 MxIRT1的酵母亚细胞定位 | 第50-57页 |
| ·半乳糖诱导型酵母表达载体pYES2.0-MxIRT1的检测及转化 | 第50-51页 |
| ·转基因酵母的诱导培养 | 第51页 |
| ·MxIRT1的亚细胞定位 | 第51-57页 |
| 4 MxIRT1基因转化机理Ⅰ植物烟草 | 第57-62页 |
| ·MxIRT1正、反连接到pCAMBIA1302酶切验证 | 第57-58页 |
| ·转化农杆菌及PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第59-62页 |
| 第四章 讨论 | 第62-70页 |
| 1 MxIRT1对不同二价金属离子的作用 | 第62-67页 |
| ·对二价重金属离子Cd、Co、Ni的吸收的作用 | 第62-64页 |
| ·对Zn、Fe较显著的吸收作用 | 第64-65页 |
| ·对Cu吸收的作用 | 第65页 |
| ·对Mn基本不吸收 | 第65页 |
| ·ICP-MS实验中可能存在污染的分析及解决方法 | 第65-66页 |
| ·终止子去除的前后比较 | 第66页 |
| ·信号肽的作用 | 第66-67页 |
| ·富含组氨酸的可变区的作用 | 第67页 |
| 2 MxIRT1的亚细胞定位 | 第67-69页 |
| ·培养基的优化 | 第67页 |
| ·FM4-64与GFP共定位分析 | 第67-69页 |
| 3 MxIRT1在机理Ⅰ植物中的研究 | 第69-70页 |
| 第五章 小结与展望 | 第70-71页 |
| 1 小结: | 第70页 |
| 2 展望: | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-85页 |
