| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-22页 |
| ·microRNA简介 | 第9-12页 |
| ·miRNA的生物功能与研究意义 | 第9-11页 |
| ·miRNA,siRNA及其RNAi | 第11-12页 |
| ·miRNA的研究策略与研究进展 | 第12-19页 |
| ·miRNA的特征与miRNA的鉴定策略 | 第13-14页 |
| ·MiRNA基因的寻找 | 第14-18页 |
| ·MiRNA的作用机制及其靶基因的预测 | 第18页 |
| ·miRNA表达分析 | 第18-19页 |
| ·与胚胎发育相关的miRNA的研究意义 | 第19-20页 |
| ·研究思路 | 第20-22页 |
| ·LMW RNA分离方法改进的技术路线 | 第20页 |
| ·miRNA克隆表达的技术路线 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·菌种及载体 | 第23页 |
| ·培养基及其细菌培养用试剂 | 第23页 |
| ·分子生物学实验用试剂 | 第23-24页 |
| ·试剂盒 | 第24页 |
| ·其他试剂 | 第24-25页 |
| ·RNA适配子(adapter)及其引物 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-36页 |
| ·总RNA提取 | 第26页 |
| ·切胶回收法分离LMW RNA | 第26-27页 |
| ·FLASHPAGE Fractionator法分离LMW RNA(富集<40nt RNA) | 第27-28页 |
| ·PEG LMW RNA分离法 | 第28-29页 |
| ·LMW RNA加尾 | 第29页 |
| ·LMW RNA加5’adapter | 第29-30页 |
| ·cDNA合成 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增cDNA片断 | 第31-32页 |
| ·PCR产物回收 | 第32-33页 |
| ·制备感受态细胞 | 第33页 |
| ·PCR产物的连接 | 第33-34页 |
| ·转化 | 第34页 |
| ·电泳鉴定阳性克隆 | 第34页 |
| ·序列测定 | 第34页 |
| ·miRNA的鉴定 | 第34页 |
| ·miRNA的功能预测 | 第34-35页 |
| ·半定量PCR法检测miRNA在各组织中的表达情况 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-61页 |
| ·总RNA的提取 | 第36页 |
| ·分离LMWRNA | 第36-43页 |
| ·不同的分离方法分离LMW RNA | 第36-41页 |
| ·以不同材料分离LMW RNA | 第41-43页 |
| ·miRNA的克隆 | 第43-45页 |
| ·序列前体预测及其二级结构分析 | 第45-55页 |
| ·序列1前体序列预测与二级结构分析 | 第46-49页 |
| ·序列3前体序列预测与二级结构分析 | 第49-50页 |
| ·序列4前体序列预测与二级结构分析 | 第50-52页 |
| ·序列6前体序列预测与二级结构分析 | 第52-53页 |
| ·序列7前体序列预测与二级结构分析 | 第53-54页 |
| ·序列8前体序列预测与二级结构分析 | 第54页 |
| ·总结 | 第54-55页 |
| ·其它生物信息学分析 | 第55-57页 |
| ·序列1在miRNA库中进行比对 | 第55页 |
| ·序列1基因组中定位 | 第55-56页 |
| ·序列1与在胚胎干细胞进行比对 | 第56页 |
| ·序列1与成人血液中的miRNA比对 | 第56-57页 |
| ·序列1与已确定功能的miRNA比对 | 第57页 |
| ·miRNA的表达分析 | 第57-61页 |
| ·半定量PCR法可行性分析 | 第58-59页 |
| ·miRNA在8种细胞中的表达 | 第59-61页 |
| 小结与展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-68页 |