| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1. 苹果茎痘病毒(ASPV) | 第12-14页 |
| ·ASPV的发现 | 第12-13页 |
| ·生物学特性 | 第13页 |
| ·分子生物学特性 | 第13页 |
| ·检测技术 | 第13-14页 |
| ·指示植物法 | 第13页 |
| ·血清学检测 | 第13-14页 |
| ·分子生物学检测 | 第14页 |
| ·国内研究现状 | 第14页 |
| ·防治对策 | 第14页 |
| 2 cp基因抗病毒基因工程的研究进展 | 第14-16页 |
| ·cp基因抗病毒基因工程的应用 | 第15页 |
| ·cp基因介导抗性机制 | 第15-16页 |
| 3 反义RNA技术 | 第16-17页 |
| ·反义RNA技术作用原理 | 第16页 |
| ·反义RNA技术在植物基因工程中的应用 | 第16-17页 |
| 4 植物转基因研究 | 第17-23页 |
| ·植物遗传转化的发展 | 第17-18页 |
| ·根癌农杆菌介导的植物转基因 | 第18-23页 |
| ·根癌农杆菌的研究简史 | 第18-19页 |
| ·根癌农杆菌的生物学特性 | 第19页 |
| ·根癌农杆菌Ti质粒的结构与功能 | 第19-20页 |
| ·根癌农杆菌Ti质粒介导的整合转化程序的特点 | 第20页 |
| ·根癌农杆菌转化的机理 | 第20页 |
| ·根癌农杆菌T-DNA转移的影响因素 | 第20-22页 |
| ·转化细胞的选择培养和再生 | 第22-23页 |
| 5. 目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 砂梨上苹果茎痘病毒的分离鉴定 | 第24-33页 |
| 1 ASPV分子生物学检测 | 第24-29页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·材料与方法 | 第24-26页 |
| ·待检样品 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·样品提取缓冲液 | 第24页 |
| ·试管捕捉RT-PCR(TC-RT-PCR) | 第24-25页 |
| ·PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的制备及染色 | 第26页 |
| ·结果与分析 | 第26-29页 |
| ·TC-RT-PCR检测 | 第26-29页 |
| 2 砂梨上ASPV的分离 | 第29-31页 |
| ·材料与方法 | 第29页 |
| ·供试样品 | 第29页 |
| ·指示植物 | 第29页 |
| ·接种缓冲液 | 第29页 |
| ·汁液摩擦接种及带毒叶片的保存 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-31页 |
| 3 结论与讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 ASPV的cp基因植物表达载体构建及转化烟草研究 | 第33-54页 |
| 1 前言 | 第33页 |
| 2 cp基因的克隆与序列测定 | 第33-41页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-38页 |
| ·供试材料 | 第33-34页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·cp基因的PCR扩增与检测 | 第34-35页 |
| ·目标片段的回收与纯化 | 第35-36页 |
| ·目标片段与载体的连接 | 第36页 |
| ·连接产物转化宿主菌 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌DH10B感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·热击转化大肠杆菌DH10B感受态细胞 | 第37页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第37页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38页 |
| ·PCR鉴定 | 第38页 |
| ·酶切鉴定 | 第38页 |
| ·序列测定和分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·cp基因的PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的PCR检测和酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·ASPV cp基因的序列分析 | 第40-41页 |
| 3 cp基因植物表达载体的构建 | 第41-44页 |
| ·材料与方法 | 第41-44页 |
| ·供试材料 | 第41-42页 |
| ·质粒pCAMBIA1301S的提取、酶切与纯化 | 第42-43页 |
| ·质粒PMD18-T-CP的酶切与纯化 | 第43页 |
| ·目标片段与载体的连接与转化 | 第43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44页 |
| ·重组植物表达载体的PCR和酶切鉴定 | 第44页 |
| 4 叶盘法转化西方烟 | 第44-54页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·材料与方法 | 第44-48页 |
| ·供试材料 | 第44-45页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·重组植物表达载体转化根癌农杆菌感受态细胞 | 第45-46页 |
| ·烟草的转化、再生和筛选 | 第46-47页 |
| ·选择压力的确定 | 第47页 |
| ·遗传转化体系的优化 | 第47页 |
| ·Hyb抗性植株的筛选及PCR检测 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-52页 |
| ·外植体对潮霉素的敏感性 | 第48-49页 |
| ·根癌农杆菌菌液浓度对外植体侵染的影响 | 第49页 |
| ·不同浸染时间对根癌农杆菌侵染力的影响 | 第49-50页 |
| ·Hyb抗性烟草植株的获得 | 第50-51页 |
| ·Hyb抗性植株的PCR检测 | 第51-52页 |
| ·结论与讨论 | 第52-54页 |
| 附录 试验常用溶液配方 | 第54-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65页 |