| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-13页 |
| 1 禽流感病毒 NP研究近况 | 第8-9页 |
| 2 酵母双杂交及其应用 | 第9-11页 |
| 3 研究的目的和意义 | 第11-13页 |
| 第二章 NP基因cDNA的扩增和克隆 | 第13-24页 |
| 1 材料 | 第13-14页 |
| 2 方法 | 第14-20页 |
| ·病毒总 RNA的提取 | 第14-15页 |
| ·引物设计及合成 | 第15页 |
| ·反转录 PCR扩增 | 第15-17页 |
| ·NP的cDNA克隆 | 第17页 |
| ·NP编码区基因的扩增 | 第17-18页 |
| ·pTIG-Trx/H5NP原核表达载体构建 | 第18-20页 |
| 3 结果 | 第20-23页 |
| ·RT-PCR扩增 NP基因 | 第20页 |
| ·克隆NP基因 | 第20-21页 |
| ·NP基因编码区扩增与克隆鉴定 | 第21-23页 |
| 4 讨论 | 第23-24页 |
| 第三章 NP重组蛋白的表达及多抗制备 | 第24-37页 |
| 1 材料 | 第24-26页 |
| 2 方法 | 第26-31页 |
| ·确定克隆化基因在大肠杆菌中的表达 | 第26页 |
| ·NP融合蛋白的Western blot分析 | 第26-27页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第27页 |
| ·NP融合蛋白的大量表达与纯化 | 第27-28页 |
| ·兔多抗血清的制备 | 第28-29页 |
| ·免疫亲和纯化多抗血清 | 第29-31页 |
| 3 结果 | 第31-34页 |
| ·在大肠杆菌中表达重组蛋白NP-ETag | 第31页 |
| ·NP融合蛋白的特异性鉴定 | 第31-32页 |
| ·大量表达纯化重组蛋白质 NP-ETag | 第32-33页 |
| ·制备NP兔多抗血清 | 第33页 |
| ·免疫亲和层析纯化 NP抗体 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-37页 |
| 第四章 酵母双杂交筛选人肺细胞文库中与NP相互作用的蛋白 | 第37-56页 |
| 1 材料 | 第37-39页 |
| 2 方法 | 第39-45页 |
| ·载体的构建 | 第39-40页 |
| ·人肺组织cDNA文库滴度的测定 | 第40页 |
| ·人肺组织cDNA文库的扩增及质粒提取 | 第40页 |
| ·变性鲑精 DNA的制备 | 第40页 |
| ·酵母菌株cdc25H(a)表现型验证 | 第40-41页 |
| ·cdc25H(a)酵母感受态的制备 | 第41页 |
| ·酵母转化 | 第41-42页 |
| ·对所制感受态细胞的质量评估 | 第42-43页 |
| ·Western Blot检测诱饵质粒在酵母中的表达 | 第43页 |
| ·文库筛选 | 第43-45页 |
| 3 结果 | 第45-53页 |
| ·诱饵质粒的构建 | 第45页 |
| ·人肺组织cDNA文库滴度的测定 | 第45页 |
| ·酵母菌株cdc25H(a)的表型验证 | 第45-46页 |
| ·酵母转化结果 | 第46-48页 |
| ·文库筛选 | 第48-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 论文部分参考文献 | 第57-63页 |
| 英文缩略词表 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简历 | 第65页 |