| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一部分 化学合成siRNA对GT38细胞EBNA2基因表达的抑制 | 第8-27页 |
| 引言 | 第8页 |
| 第一章 材料与方法 | 第8-13页 |
| 1.仪器、试剂和耗材 | 第8-9页 |
| 2.化学合成法的小干涉链的设计 | 第9-10页 |
| 3.化学合成siRNA的转染 | 第10页 |
| 4.RNAi转染效率的检测 | 第10-11页 |
| 5.RNAi效应的检测 | 第11-13页 |
| 6.统计学方法 | 第13页 |
| 第二章 结果 | 第13-17页 |
| 1.siRNA转染效率的检测 | 第13页 |
| 2.不同siRNA对EBNA2 mRNA表达的影响 | 第13-14页 |
| 3.转染siRNA后时间对EBNA2 mRNA表达的影响 | 第14页 |
| 4.不同浓度siRNA对EBNA2 mRNA表达的影响 | 第14-16页 |
| 5.Hoechst 33258染色结果 | 第16-17页 |
| 6.透射电镜观察细胞超微结构变化 | 第17页 |
| 7.流式细胞术检测EBNA2 siRNA诱导的GT38细胞周期及凋亡 | 第17页 |
| 第三章 讨论 | 第17-23页 |
| 一、RNA干涉技术 | 第17-20页 |
| 二、目的基因的选择 | 第20-21页 |
| 三、靶细胞的选择 | 第21-23页 |
| 第四章 结论 | 第23-24页 |
| 参考文献 | 第24-27页 |
| 第二部分 抑制EBV潜伏期基因EBNA2 pSUPER retro RNAi系统的构建 | 第27-43页 |
| 引言 | 第27页 |
| 第一章 材料与方法 | 第27-35页 |
| 1.仪器、试剂和耗材 | 第27-29页 |
| 2.载体的选择 | 第29-30页 |
| 3.由DNA转录生成siRNA的策略 | 第30页 |
| 4.靶向EBNA2基因寡核苷酸的设计 | 第30-31页 |
| 5.寡核苷酸与pSUPER载体的连接 | 第31页 |
| 6.连接产物的转化 | 第31-32页 |
| 7.重组质粒的筛选及鉴定 | 第32-33页 |
| 8.转染包装细胞系PA317 | 第33-34页 |
| 9.病毒滴度的测定 | 第34-35页 |
| 第二章 结果 | 第35-37页 |
| 1.pSUPER.retro.neo+gfp质粒酶切后电泳结果 | 第35页 |
| 2.重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.靶序列鉴定 | 第36页 |
| 4.逆转录病毒载体的包装 | 第36-37页 |
| 5.逆转录病毒滴度测定 | 第37页 |
| 第三章 讨论 | 第37-40页 |
| 第四章 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 综述 | 第43-58页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-66页 |
| 论著 | 第66-71页 |
