| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-47页 |
| 1 mRNA RT-PCR定量方法研究进展 | 第17-26页 |
| ·竞争性RT-PCR方法 | 第18-20页 |
| ·原理 | 第18页 |
| ·竞争性模板的构建 | 第18-19页 |
| ·主要优缺点 | 第19-20页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR方法 | 第20-26页 |
| ·原理 | 第20-21页 |
| ·标准品 | 第21页 |
| ·几种常用的实时荧光定量RT-PCR技术 | 第21-24页 |
| ·DNA结合染色技术 | 第22页 |
| ·水解探针技术 | 第22-23页 |
| ·分子灯塔技术(Molecular beacons) | 第23页 |
| ·杂交探针技术 | 第23-24页 |
| ·引物和探针的设计 | 第24-25页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·探针设计 | 第25页 |
| ·mRNA质量控制 | 第25-26页 |
| ·重复性 | 第26页 |
| 2 药物代谢酶研究进展 | 第26-40页 |
| ·细胞色素P450s研究概况 | 第27-34页 |
| ·CYP命名与分类 | 第27-28页 |
| ·CYP的催化机制 | 第28页 |
| ·CYP的研究方法 | 第28-30页 |
| ·研究体系的选择 | 第28-30页 |
| ·常用的研究方法 | 第30页 |
| ·肝脏CYPs | 第30-33页 |
| ·CYP1A2(咖啡去甲基酶) | 第31页 |
| ·CYP2A6(香豆素7-羟化酶) | 第31-32页 |
| ·CYP2C | 第32页 |
| ·CYP2D6(丁呋洛尔1-羟化酶) | 第32-33页 |
| ·CYP2E1(氯唑沙宗羟化酶) | 第33页 |
| ·CYP3A4 | 第33页 |
| ·药物对CYPs活性的影响 | 第33-34页 |
| ·CYPs在新药安全性评价中的应用 | 第34页 |
| ·尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的研究进展 | 第34-37页 |
| ·UGT的种类 | 第34-35页 |
| ·UGT的作用与功能 | 第35-36页 |
| ·影响UGT的因素 | 第36-37页 |
| ·谷胱甘肽S-转移酶研究概况 | 第37-40页 |
| ·mGST的分型 | 第37-38页 |
| ·mGSTs的组织分布 | 第38页 |
| ·mGSTs的功能 | 第38-40页 |
| ·对乙酰氨基酚的毒性代谢 | 第38-39页 |
| ·儿茶酚胺类药物的灭活代谢 | 第39页 |
| ·在烷化剂药物耐药性机制中的作用 | 第39页 |
| ·抗脂质过氧化作用 | 第39-40页 |
| 3 新药安全性评价动物模型研究进展 | 第40-45页 |
| ·小型猪新药安全性评价动物模型研究进展 | 第40-42页 |
| ·国外小型猪新药安全性评价动物模型研究概况 | 第41-42页 |
| ·中国实验用小型猪新药安全性评价实验模型研究概况 | 第42页 |
| ·其他实验动物作为新药安全性评价动物模型的研究概况 | 第42-45页 |
| ·狗 | 第42-43页 |
| ·猴 | 第43页 |
| ·大鼠 | 第43-44页 |
| ·兔 | 第44-45页 |
| 4 研究的目的意义及技术路线 | 第45-47页 |
| ·研究的目的意义 | 第45-46页 |
| ·技术路线 | 第46-47页 |
| 第二章 实时荧光定量研究实验用小型猪细胞色素P450 mRNA表达水平方法的建立 | 第47-67页 |
| 1 材料与方法 | 第47-56页 |
| ·最主要的仪器 | 第47-48页 |
| ·分子生物学试剂 | 第48-49页 |
| ·6个基因的标准品引物、定量引物及TaqMan探针 | 第49-50页 |
| ·肝脏样品的来源 | 第50-51页 |
| ·总RNA提取 | 第51页 |
| ·cDNA的合成 | 第51-52页 |
| ·实时荧光定量标准品的克隆 | 第52-54页 |
| ·PCR扩增 | 第52页 |
| ·PCR产物的回收 | 第52-53页 |
| ·与pMD 18-T载体的连接 | 第53页 |
| ·连接产物的转化 | 第53-54页 |
| ·质粒的抽提及鉴定 | 第54页 |
| ·TaqMan定量方法的建立及方法学评价 | 第54-56页 |
| ·10倍连续梯度系列标准品的制备 | 第54-55页 |
| ·TaqMan定量方法的建立 | 第55页 |
| ·方法学评价 | 第55-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-62页 |
| ·总RNA的提取结果 | 第56-57页 |
| ·标准品的克隆结果 | 第57-58页 |
| ·cDNA PCR结果 | 第57页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定结果 | 第57-58页 |
| ·重组质粒的测序结果 | 第58页 |
| ·重组质粒的倍比稀释 | 第58-61页 |
| ·纯度鉴定、浓度测定及拷贝数浓度的换算 | 第58-61页 |
| ·TaqMan定量的方法学评价结果 | 第61-62页 |
| ·方法的有效检测范围 | 第61页 |
| ·方法的重复性 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-67页 |
| ·建立了有效的、可重复的TaqMan定量方法 | 第62-64页 |
| ·影响克隆忠实性的主要因素 | 第64-67页 |
| 第三章 应用TaqMan定量方法研究巴马香猪、贵州小型猪、荣昌猪肝脏CYP3A29 mRNA的表达 | 第67-73页 |
| 1 材料与方法 | 第67-68页 |
| ·肝脏cDNA样品的来源 | 第67-68页 |
| ·TaqMan PCR | 第68页 |
| ·统计分析 | 第68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-73页 |
| ·中国小型猪肝脏CYP3A29 mRNA水平与人肝CYP3A4的比较 | 第69-70页 |
| ·中国猪肝脏CYP3A29 mRNA水平的品种(系)间比较 | 第70-71页 |
| ·中国猪肝脏CYP3A29 mRNA表达的品系(种)内变异 | 第71-73页 |
| 第四章 应用TaqMan定量方法研究各主要年龄段巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的组织分布 | 第73-81页 |
| 1 材料与方法 | 第73-74页 |
| ·组织样品的来源、总RNA提取及cDNA合成 | 第73-74页 |
| ·TaqMan PCR | 第74页 |
| ·统计分析 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-77页 |
| 3 讨论 | 第77-81页 |
| ·年龄对巴马香猪肝脏CYP3A29 mRNA表达的影响 | 第77-78页 |
| ·年龄对巴马香猪肝外组织CYP3A29 mRNA表达的影响 | 第78-79页 |
| ·巴马香猪CYP3A29 mRNA组织分布与人CYP3A4的比较 | 第79页 |
| ·年龄影响人及动物CYP3A表达的机制 | 第79-81页 |
| 第五章 应用TaqMan定量方法研究巴马香猪CYP1A1、2A19、2D25、2E1 mRNA表达的组织分布 | 第81-87页 |
| 1 材料与方法 | 第81-82页 |
| ·cDNA样品的来源 | 第81页 |
| ·TaqMan PCR | 第81-82页 |
| ·统计分析 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-87页 |
| ·巴马香猪CYP1A1 mRNA组织分布与人体对应酶的比较 | 第83-84页 |
| ·巴马香猪CYP2A19 mRNA组织分布与人体对应酶的比较 | 第84页 |
| ·巴马香猪CYP2D25 mRNA组织分布与人体对应酶的比较 | 第84-85页 |
| ·巴马香猪CYP2E1 mRNA组织分布与人体对应酶的比较 | 第85-87页 |
| 第六章 应用TaqMan定量方法研究利福平对巴马香猪肝脏CYP3A29 mRNA表达的诱导作用 | 第87-91页 |
| 1 材料与方法 | 第87-88页 |
| ·肝脏cDNA样品的来源 | 第87-88页 |
| ·TaqMan PCR | 第88页 |
| ·统计分析 | 第88页 |
| 2 结果与分析 | 第88-89页 |
| 3 讨论 | 第89-91页 |
| ·利福平对巴马香猪肝脏CYP3A29 mRNA的诱导作用及与人类的比较 | 第89-90页 |
| ·利福平诱导巴马香猪肝脏CYP3A29 mRNA表达的机制 | 第90-91页 |
| 全文小结和创新点 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 博士期间发表和待发论文 | 第113-114页 |
| 附录 | 第114-123页 |
