| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| ·卤醇脱卤酶概述 | 第8-9页 |
| ·卤醇脱卤酶的人工改造 | 第9-10页 |
| ·基于宏基因组学的卤醇脱卤酶筛选 | 第10-13页 |
| ·环境总DNA 的提取 | 第10-11页 |
| ·基于核酸序列的筛选 | 第11-12页 |
| ·基于酶活性的筛选 | 第12-13页 |
| ·论文研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 定点突变对卤醇脱卤酶 HheC 的改造 | 第15-25页 |
| ·实验材料 | 第15-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第15-16页 |
| ·实验试剂及配制 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-21页 |
| ·突变体的获得 | 第17-19页 |
| ·突变体蛋白的表达及纯化 | 第19-20页 |
| ·PNSHH 测定突变体活性 | 第20-21页 |
| ·荧光分析 | 第21页 |
| ·实验结果 | 第21-23页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第21-22页 |
| ·FPLC 纯化突变体蛋白 | 第22-23页 |
| ·PNSHH 测定突变体活性 | 第23页 |
| ·荧光分析结果 | 第23页 |
| ·讨论 | 第23-25页 |
| 第三章 饱和突变对卤醇脱卤酶HHEC 的改造 | 第25-35页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第25页 |
| ·实验试剂及配制 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·突变体文库的构建 | 第26-28页 |
| ·比色法筛选突变体文库 | 第28-29页 |
| ·卤离子释放法测稳态动力学参数 | 第29-30页 |
| ·气相色谱分析 | 第30页 |
| ·实验结果 | 第30-33页 |
| ·W249X 文库筛选结果 | 第30-32页 |
| ·W249P 气相分析结果 | 第32页 |
| ·W249P/F86X/W139X 和F186X/Y187X 文库筛选结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 基于宏基因组学的卤醇脱卤酶筛选 | 第35-47页 |
| ·实验材料 | 第35-37页 |
| ·质粒、菌株及土壤样品 | 第35页 |
| ·主要实验仪器和设备 | 第35-36页 |
| ·实验试剂及配制 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-40页 |
| ·DNA 提取方法 | 第37页 |
| ·富集培养方法 | 第37-38页 |
| ·PCR 克隆技术筛选新酶 | 第38-39页 |
| ·粘性末端连接构建宏基因组文库 | 第39-40页 |
| ·平末端连接构建宏基因组文库 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-45页 |
| ·DNA 提取及纯度分析 | 第40-42页 |
| ·土壤样品富集培养 | 第42页 |
| ·卤醇脱卤酶相关基因的扩增结果 | 第42-44页 |
| ·文库构建结果 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 结论 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 攻硕期间的研究成果 | 第55-56页 |