| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-20页 |
| ·本课题研究意义 | 第9-10页 |
| ·国内外研究概况 | 第10-19页 |
| ·植物防御素的结构特点 | 第11-12页 |
| ·植物防御素的生物活性及作用机制 | 第12-15页 |
| ·植物防御素的基因表达与调控 | 第15页 |
| ·植物防御素的应用和展望 | 第15-17页 |
| ·荧光技术在生命领域中的应用 | 第17-19页 |
| ·本课题研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 重组质粒构建、定点突变及融合蛋白的表达纯化 | 第20-37页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·菌株和载体 | 第20页 |
| ·引物 | 第20页 |
| ·主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要溶液及配制 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-32页 |
| ·手掌参γ-硫素基因的克隆 | 第23-26页 |
| ·质粒抽提 | 第23-24页 |
| ·PCR 扩增、琼脂糖凝胶电泳及胶回收 | 第24-25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·连接与转化 | 第25-26页 |
| ·菌落PCR 鉴定与测序 | 第26页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物与表达载体的双酶切、连接 | 第26页 |
| ·转化感受态细胞 | 第26页 |
| ·菌落PCR 鉴定及测序 | 第26-27页 |
| ·双酶切鉴定 | 第27页 |
| ·基于重叠延伸PCR 的定点突变 | 第27-29页 |
| ·引物的设计 | 第27页 |
| ·重叠延伸PCR | 第27-29页 |
| ·质粒转化、菌落PCR 及测序 | 第29页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·融合蛋白的纯化和脱盐 | 第30-31页 |
| ·考马斯亮蓝G-250 法测定蛋白浓度 | 第31页 |
| ·蛋白样品冻干处理 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-35页 |
| ·目标DNA 的PCR 扩增以及重组表达载体的测序结果 | 第32-33页 |
| ·定点突变结果 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pET-32a(+)/gcthionin 的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 融合蛋白的甲酸切割及内源荧光检测 | 第37-42页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第37页 |
| ·实验仪器 | 第37页 |
| ·主要试剂及配制 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·样品制备 | 第37-38页 |
| ·融合蛋白的甲酸切割 | 第38页 |
| ·融合蛋白甲酸切割过程的内源荧光检测 | 第38页 |
| ·实验结果 | 第38-40页 |
| ·融合蛋白甲酸切割结果 | 第38-39页 |
| ·酸切割过程的稳态荧光光谱研究 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 融合蛋白的抗菌及酶抑制剂活性研究 | 第42-48页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第42-43页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·主要试剂及配制 | 第42页 |
| ·菌株 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白的抗菌活性检测 | 第43页 |
| ·黄粉甲虫α-淀粉酶（TMA）粗酶液的提取 | 第43页 |
| ·融合蛋白的酶抑制剂活性检测（Bernfeld 法） | 第43-44页 |
| ·分子对接模拟Gcthionin 与TMA 相互作用 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-46页 |
| ·融合蛋白抗菌活性 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白酶抑制剂活性 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 结束语 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 攻硕期间取得的研究成果 | 第54-55页 |
