| 1 引言 | 第1-13页 |
| ·国内外研究概况 | 第8-9页 |
| ·实验总体思路和研究的目的及其意义 | 第9-11页 |
| ·选择禽流感病毒HA基因作为表达基因 | 第9页 |
| ·选择马立克病毒的基因作为表达载体 | 第9-10页 |
| ·研究的目的及意义 | 第10-11页 |
| ·技术路线 | 第11-12页 |
| ·研究目标 | 第12-13页 |
| 2.材料 | 第13-15页 |
| ·毒株 | 第13页 |
| ·载体与菌株 | 第13页 |
| ·克隆载体PMD18-T，pGEM-TEasy | 第13页 |
| ·载体PUC19 | 第13页 |
| ·载体pDsRed2 | 第13页 |
| ·菌株 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13-14页 |
| ·核酸的提取和PCR主要用的试剂 | 第13页 |
| ·DNA克隆方面所用的主要试剂 | 第13-14页 |
| ·主要酶类 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| 3.方法 | 第15-25页 |
| ·PCR引物的设计 | 第15页 |
| ·禽流感病毒HA基因引物的设计 | 第15页 |
| ·马立克病毒基因US1，US2引物的设计 | 第15页 |
| ·包含完整HA基因阅读框和荧光红显色基因片断引物的设计 | 第15页 |
| ·HA基因-红色荧光蛋白(PHD1)表达盒的构建 | 第15-18页 |
| ·禽流感病毒总RNA的提取及PCR扩增HA基因 | 第15-16页 |
| ·HA基因片段的回收 | 第16页 |
| ·纯度鉴定 | 第16页 |
| ·连接 | 第16页 |
| ·转化 | 第16-17页 |
| ·质粒的提取 | 第17页 |
| ·酶切鉴定阳性克隆 | 第17页 |
| ·测序 | 第17-18页 |
| ·大剂量的酶切 | 第18页 |
| ·回收目的片段，并将其进行连接 | 第18页 |
| ·构建新的质粒PHD1 | 第18页 |
| ·重组质粒PUCF12的构建 | 第18-20页 |
| ·马立克病毒DNA的提取，及PCR扩增US1，US2基因 | 第18-19页 |
| ·连接，转化，测序 | 第19页 |
| ·PUCF1的构建 | 第19-20页 |
| ·重组质粒PUCF12的构建 | 第20页 |
| ·最终质粒PRAF12的构建 | 第20-22页 |
| ·包含完整HA基因阅读框和荧光显色基因片段的扩增 | 第20-21页 |
| ·酶切 | 第21页 |
| ·回收目的片段，并将其进行连接 | 第21页 |
| ·重组质粒RHAF12的构建 | 第21-22页 |
| ·质粒RHAF12构建模式图 | 第22-25页 |
| ·质粒PHD1的构建 | 第22-23页 |
| ·质粒PUCF12的构建 | 第23-24页 |
| ·质粒RHAF12的构建 | 第24-25页 |
| 4.结果和分析 | 第25-36页 |
| ·禽流感病毒HA基因的扩增 | 第25页 |
| ·重组质粒PMD18-T-HA的鉴定 | 第25-27页 |
| ·重组质粒PHD1的成功构建 | 第27-28页 |
| ·马立克病毒US1，US2基因的克隆 | 第28-31页 |
| ·PUCF1质粒的构建成功 | 第31页 |
| ·PUCF12质粒的构建成功 | 第31-32页 |
| ·最终表达质粒RHAF12的构建成功： | 第32-36页 |
| 5 讨论 | 第36-39页 |
| ·实验的可行性 | 第36页 |
| ·RNA提取 | 第36页 |
| ·关于PCR问题 | 第36-37页 |
| ·关于引物设计问题 | 第37页 |
| ·关于连接问题 | 第37-38页 |
| ·关于转化问题 | 第38页 |
| ·本实验结果的应用前景 | 第38-39页 |
| 6 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第44-45页 |
| 作者简历 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 上海畜牧兽医通讯 | 第47-50页 |