| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-18页 |
| Ⅰ. GENERAL INTRODUCTION | 第18-22页 |
| Ⅱ. LITERATURE REVIEW | 第22-49页 |
| SECTION A: AN OVERVIEW OF CRUSTACEAN VIRUS | 第22-34页 |
| ·Introduction | 第22页 |
| ·White Spot Syndrome Virus(WSSV) | 第22-27页 |
| ·General Properties of WSSV | 第23-25页 |
| ·Gross Clinical signs and General Pathology | 第25-26页 |
| ·Detection of WSSV | 第26-27页 |
| ·Pathogenicity | 第27-29页 |
| ·Total Haemocyte Count | 第27-28页 |
| ·Effect of WSSV at different developmental stages of shrimp | 第28页 |
| ·Virus entry and progression of the disease | 第28-29页 |
| ·Virus transmission | 第29页 |
| ·Genomics of WSSV | 第29-32页 |
| ·Proteomics of WSSV | 第32-34页 |
| ·Proteomic analysis of structural proteins of WSSV | 第33页 |
| ·Proteomic analysis of non-structural proteins of WSSV | 第33-34页 |
| SECTION B: DEFENSE SYSTEM OF CRAYFISH(CRUSTACEAN) | 第34-43页 |
| ·Introduction to crayfish | 第34-35页 |
| ·Defense system of crayfish(Crustacean) | 第35-43页 |
| ·Haematopoiesis | 第37-38页 |
| ·Cytokines | 第38-39页 |
| ·proPO system | 第39-41页 |
| ·Apoptosis | 第41-42页 |
| ·Quasi-immune response | 第42-43页 |
| ·Crustacean primary cell culture | 第43页 |
| SECTION C: RECOMBINANT VACCINES | 第43-49页 |
| ·Introduction | 第43-45页 |
| ·Development of recombinant vaccines against WSSV | 第45-47页 |
| ·Vaccine evaluation | 第47页 |
| ·Methods of vaccine delivery | 第47-49页 |
| ·Injection Administration | 第47-48页 |
| ·Immersion administration | 第48页 |
| ·Oral administration | 第48-49页 |
| Ⅲ. The efficacy of recombinant vaccines against white spot syndrome virus in Procambarus clarkii | 第49-83页 |
| ·Abstract | 第49-50页 |
| ·Materials and Methods | 第50-66页 |
| ·Location | 第50页 |
| ·Preparation of Lab-wares and Reagents | 第50页 |
| ·Virus stock production | 第50-51页 |
| ·In vivo titration | 第51-55页 |
| ·Amplification of viral structural genes | 第55-56页 |
| ·Ligation of purified DNA | 第56-59页 |
| ·Construction of recombinant plasmids pUCm-TVP19 and pUCm-TVP28 | 第59-60页 |
| ·Protein production and purification | 第60-63页 |
| ·Determination of protein concentration | 第63页 |
| ·Vaccine preparation | 第63-64页 |
| ·Coating of food pellets | 第63-64页 |
| ·Vaccination experiment | 第64-65页 |
| ·Oral vaccine | 第64页 |
| ·Injection vaccine | 第64页 |
| ·Immersion vaccine | 第64-65页 |
| ·Challenge | 第65页 |
| ·Statistical analysis | 第65-66页 |
| ·Results | 第66-79页 |
| ·Amplification and identification of viral structural genes from WSSV DNA | 第66-67页 |
| ·Extraction of genomic DNA | 第67页 |
| ·WSSV DNA purification | 第67页 |
| ·Cloning and Expression of recombinant plasmid | 第67-68页 |
| ·VP19 and VP28 sequencing and homology | 第68-72页 |
| ·Expression of recombinant proteins | 第72页 |
| ·SDS-PAGE | 第72页 |
| ·Western Immunobloting | 第72页 |
| ·Protein estimation | 第72-73页 |
| ·Vaccination experiment | 第73-79页 |
| ·Oral vaccine | 第73-77页 |
| ·Injection vaccine | 第77-78页 |
| ·Immersion vaccine | 第78-79页 |
| ·Discussion | 第79-83页 |
| Ⅳ. Protection of Procambarus clarkii against white spot syndrome virus recombinant vaccines expressed in Pichia pastoris | 第83-116页 |
| ·Abstract | 第83-84页 |
| ·Oral vaccine | 第83页 |
| ·Injection vaccine | 第83页 |
| ·Immersion vaccine | 第83-84页 |
| ·Materials and Methods | 第84-99页 |
| ·Location | 第84页 |
| ·Construction of Expression plasmid | 第84-87页 |
| ·Preparation of Competent cell(TOP10F') | 第87页 |
| ·Preparation of Expression vector(pPIC9K) | 第87页 |
| ·Extraction of plasmid | 第87-89页 |
| ·Linearization of recombinant plasmids | 第89页 |
| ·Preparation of competent pastoris strain GS115 cells | 第89-90页 |
| ·Purification and concentration of plasmids after digestion | 第90页 |
| ·Screening of trnsformants | 第90-92页 |
| ·Screening of Geneticin(?) | 第90-91页 |
| ·Screening by PCR | 第91-92页 |
| ·Total DNA isolation from Pichia | 第91-92页 |
| ·PCR reaction | 第92页 |
| ·Heterologous expression/Optimization of maximum expression levels of Pichia | 第92页 |
| ·Protein expression in plasmid | 第92-93页 |
| ·purification of reVP19Y and reVP28y | 第93-94页 |
| ·Protein expression | 第94-95页 |
| ·SDS-PAGE | 第94页 |
| ·Western Immunobloting | 第94页 |
| ·Determination of protein concentration | 第94-95页 |
| ·Vaccine preparation | 第95-97页 |
| ·Oral vaccine | 第95-96页 |
| ·Injection vaccine | 第96-97页 |
| ·Immersion vaccine | 第97页 |
| ·Vaccination | 第97-99页 |
| ·Coating of food pellets | 第98页 |
| ·Oral vaccine | 第98页 |
| ·Injection vaccine | 第98-99页 |
| ·Immersion vaccine | 第99页 |
| ·Challenge | 第99页 |
| ·Statistical analysis | 第99页 |
| ·Results | 第99-113页 |
| ·reVP19Y and reVP28Y amplified by PCR | 第99-100页 |
| ·Screening and identification of positive clones | 第100页 |
| ·Construction and Extraction of Recombinant plasmids | 第100页 |
| ·Transformation of recombinant plasmids | 第100页 |
| ·Recombination of pPIC9K-VP19 and pPIC9K-VP28 | 第100-101页 |
| ·Linearization of pPIC9K-VP19 and pPIC9K-VP28 | 第101页 |
| ·Selected conditions of pPIC9K-VP19 and pPIC9K-VP28 genes in P. pastoris | 第101页 |
| ·Transformation of pPIC9K-VP19 and pPIC9K-VP28 | 第101页 |
| ·Screening of P.pastoris strain | 第101-102页 |
| ·Protein expression | 第102页 |
| ·SDS-PAGE | 第102页 |
| ·Western Immunobloting | 第102页 |
| ·Protein estimation | 第102-103页 |
| ·Vaccination | 第103-113页 |
| ·Oral vaccine | 第103-110页 |
| ·Injection vaccine | 第110-111页 |
| ·Immersion vaccine | 第111-113页 |
| ·Discussion | 第113-116页 |
| Ⅴ. CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS | 第116-118页 |
| Ⅵ. REFERENCES | 第118-136页 |
| Ⅶ. APPENDIX | 第136-143页 |
| Ⅷ. LIST OF PUBLICATIONS | 第143-144页 |
| Ⅸ. ACKNOWLEDGEMENTS | 第144页 |
