| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1． 前言 | 第7-20页 |
| 1．1 植酸酶的生物学性质 | 第8-11页 |
| 1．1．1 植酸酶的分类及来源 | 第8-9页 |
| 1．1．2 植酸酶的作用机理 | 第9页 |
| 1．1．3 植酸酶的酶学特性 | 第9-10页 |
| 1．1．4 植酸酶的酶活测定 | 第10-11页 |
| 1．2 植酸酶的研究进展 | 第11-14页 |
| 1．2．1 植酸酶基因 | 第11-13页 |
| 1．2．2 植酸酶的基因工程 | 第13-14页 |
| 1．3 真核及原核表达系统简介 | 第14-19页 |
| 1．3．1 巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统 | 第14-16页 |
| 1．3．2 pET原核表达系统 | 第16-19页 |
| 1．4 本研究的目的 | 第19-20页 |
| 2． 材料与方法 | 第20-31页 |
| 2．1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2．1．1 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2．1．2 药品与酶 | 第20页 |
| 2．1．3 培养基与贮备液 | 第20-22页 |
| 2．1．4 试剂与缓冲溶液 | 第22-23页 |
| 2．1．5 供试抗生素 | 第23-24页 |
| 2．2 实验方法 | 第24-31页 |
| 2．2．1 土曲霉植酸酶基因phyA的克隆 | 第24页 |
| 2．2．2 枯草芽孢杆菌植酸酶基因phyC的克隆 | 第24-25页 |
| 2．2．3 大肠杆菌质粒DNA的抽提及纯化 | 第25页 |
| 2．2．4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2．2．5 凝胶回收目的DNA | 第26页 |
| 2．2．6 植酸酶基因表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2．2．7 大肠杆菌质粒的快速检测 | 第27页 |
| 2．2．8 毕赤酵母细胞的转化 | 第27-28页 |
| 2．2．9 大肠杆菌细胞BL21的转化 | 第28页 |
| 2．2．10 表达菌株植酸酶酶活性的平板检测 | 第28页 |
| 2．2．11 表达菌株的PCR检测确证 | 第28-29页 |
| 2．2．12 植酸酶基因(phyA)在毕赤酵母GS115中的诱导表达 | 第29页 |
| 2．2．13 植酸酶基因(phyC)在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第29页 |
| 2．2．14 植酸酶酶活性的测定 | 第29-30页 |
| 2．2．15 SDS-PAGE凝胶的制备及发酵上清液的蛋白质电泳 | 第30页 |
| 2．2．16 重组酵母及大肠杆菌重组菌株植酸酶性质的研究 | 第30-31页 |
| 3． 结果与分析 | 第31-42页 |
| 3．1 土曲霉植酸酶phyA基因的克隆 | 第31-33页 |
| 3．1．1 土曲霉总DNA的提取 | 第31页 |
| 3．1．2 土曲霉中phyA的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 3．1．3 植酸酶phyA基因表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 3．2 枯草芽孢杆菌植酸酶phyC基因的克隆 | 第33-35页 |
| 3．2．1 枯草芽孢杆菌中phyC的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 3．2．2 植酸酶phyC基因表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 3．3 酵母的电击转化和重组子的筛选 | 第35-39页 |
| 3．3．1 毕赤酵母感受态的制备 | 第35-36页 |
| 3．3．2 重组质粒pPIC9K-phyA17的线性化 | 第36页 |
| 3．3．3 重组子的筛选 | 第36-38页 |
| 3．3．4 重组酵母总DNA中phyA的PCR检测 | 第38-39页 |
| 3．4 磷酸标准曲线的制作 | 第39页 |
| 3．5 重组酵母植酸酶活性测定 | 第39-40页 |
| 3．5．1 重组酵母的筛选 | 第39-40页 |
| 3．5．2 重组酵母P．pastoris PHYA17中植酸酶的诱导表达 | 第40页 |
| 3．6 重组酵母发酵液的SDS-PAGE电泳 | 第40-41页 |
| 3．7 重组酵母植酸酶性质 | 第41-42页 |
| 4． 小结与讨论 | 第42-45页 |
| 4．1 小结 | 第42页 |
| 4．2 讨论 | 第42-45页 |
| 4．2．1 土曲霉植酸酶基因phyA的克隆及表达 | 第42-43页 |
| 4．2．2 枯草芽孢杆菌植酸酶基因phyC的克隆及表达 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 致谢 | 第48页 |
