| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第10-16页 |
| 1 GPCRs简介 | 第10-11页 |
| 1．1 GPCRs的结构特点 | 第10页 |
| 1．2 GPCRs的分类及配基的活化 | 第10-11页 |
| 2 oGPCRs作为新药靶点的研究 | 第11-14页 |
| 2．1 oGPCRs的发现 | 第11-12页 |
| 2．2 配基的发现 | 第12-13页 |
| 2．2．1 同源比较法 | 第12页 |
| 2．2．2 非同源比较法 | 第12-13页 |
| 2．2．3 配基活化的检测 | 第13页 |
| 2．3 受体—配基对的生理功能及病理意义研究 | 第13-14页 |
| 3 成功“去孤儿化”举例 | 第14页 |
| 4 问题与展望 | 第14-16页 |
| Ⅱ 材料与方法 | 第16-26页 |
| 1 实验材料 | 第16-19页 |
| 1．1 标本来源 | 第16页 |
| 1．2 菌株及质粒 | 第16-18页 |
| 1．3 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1．4 主要器材 | 第19页 |
| 2 实验方法 | 第19-26页 |
| 2．1 hGPCRc的克隆及测序 | 第19-21页 |
| 2．1．1 引物设计及合成 | 第19页 |
| 2．1．2 以RT-PCR从结肠组织扩增hGPCRc | 第19-20页 |
| 2．1．3 PCR法从人血基因组扩增hGPCRc编码序列 | 第20页 |
| 2．1．4 扩增产物的纯化回收 | 第20页 |
| 2．1．5 hGPCRc的连接 | 第20页 |
| 2．1．6 感受态制备 | 第20页 |
| 2．1．7 转化 | 第20-21页 |
| 2．1．8 阳性克隆筛选、鉴定 | 第21页 |
| 2．1．9 测序 | 第21页 |
| 2．2 hGPCRc的生物信息学分析 | 第21-22页 |
| 2．2．1 hGPCRc蛋白质序列的跨膜分析 | 第21页 |
| 2．2．2 蛋白质序列的同源分析 | 第21-22页 |
| 2．2．3 蛋白质序列的进化树分析 | 第22页 |
| 2．2．4 hGPCRc基因的染色体定位分析 | 第22页 |
| 2．2．5 蛋白质结构功能分析 | 第22页 |
| 2．3 hGPCRc基因的组织表达分布 | 第22页 |
| 2．4 表达载体GFP-hGPCRc及pcDNA3．1(+)-hGPCRc的构建 | 第22-23页 |
| 2．5 阳性重组子筛选、鉴定 | 第23页 |
| 2．6 细胞培养 | 第23-24页 |
| 2．6．1 培养液的配制 | 第23页 |
| 2．6．2 Hepes工作液配制 | 第23页 |
| 2．6．3 CHO-K_1细胞的培养 | 第23-24页 |
| 2．7 细胞转染 | 第24页 |
| 2．8 融合蛋白的细胞定位 | 第24页 |
| 2．9 阳性克隆细胞的筛选 | 第24页 |
| 2．10 RT-PCR扩增转染细胞内hGPCRc之mRNA的表达情况 | 第24页 |
| 2．11 激光扫描共聚焦显微镜测定CHO-hGPCRc细胞株内钙离子浓度 | 第24-26页 |
| Ⅲ 结果 | 第26-39页 |
| 1 hGPCRc编码基因的PCR扩增产物 | 第26页 |
| 2 目的片段hGPCRc和测序载体的连接与产物鉴定 | 第26-27页 |
| 3 hGPCRc基因扩增产物的序列测定 | 第27-30页 |
| 4 测序结果比较 | 第30-32页 |
| 5 hGPCRc的氨基酸结构域分析 | 第32页 |
| 6 hGPCRc氨基酸序列的同源分析 | 第32-33页 |
| 7 hGPCRc基因的进化树分析 | 第33-34页 |
| 8 hGPCRc基因的染色体定位 | 第34页 |
| 9 hGPCRc基因的组织表达分布 | 第34-35页 |
| 10 表达载体GFP-hGPCRc的构建和鉴定 | 第35-36页 |
| 11 表达载体pcDNA3．1(+)-hGPCRc的构建和鉴定 | 第36页 |
| 12 激光扫描共聚焦显微镜观察hGPCRc融合蛋白的细胞定位 | 第36-37页 |
| 13 CHO细胞系的转染及阳性克隆的筛选 | 第37页 |
| 14 CHO-hGPCRc细胞株稳定表达hGPCRc的鉴定 | 第37-38页 |
| 15 各化合物对胞内钙浓度的影响 | 第38-39页 |
| Ⅳ 讨论 | 第39-44页 |
| 1 GPCRs作为新药研究靶点的重要性及其配基筛选的方法 | 第39页 |
| 2 生物信息学在GPCRs中的应用 | 第39-40页 |
| 3 组织表达分布在配基筛选中的作用 | 第40-41页 |
| 4 亚细胞定位对研究GPCRs功能的重要性 | 第41页 |
| 5 配基筛选体系的建立及应用 | 第41-43页 |
| 6 GPCRs研究领域的探讨 | 第43-44页 |
| Ⅴ 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 缩略词表 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53页 |
