藤黄灰链霉菌合成麦拓莱霉素的PKS基因克隆和功能分析
| 前言 | 第1-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-20页 |
| ·抗生素的发展 | 第9-10页 |
| ·链霉菌抗生素生物合成基因的研究 | 第10-18页 |
| ·抗生素合成相关基因的克隆方法 | 第10-13页 |
| ·聚酮合成基因簇的研究 | 第13-18页 |
| ·聚酮合成酶 | 第13页 |
| ·红霉素生物合成基因簇 | 第13-16页 |
| ·苦霉素生物合成基因簇 | 第16-18页 |
| ·本文的研究意义和主要研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 麦拓莱霉素生物合成基因的克隆 | 第20-35页 |
| ·材料和方法 | 第20-26页 |
| ·菌种和质粒 | 第20页 |
| ·生化试剂和仪器 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·滕黄灰链霉菌培养 | 第21页 |
| ·大肠杆菌的培养 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第22页 |
| ·琼脂糖凝胶中目的片段的回收 | 第22页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞制备 | 第22-23页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第23-24页 |
| ·双酶切反应体系 | 第24页 |
| ·滕黄灰链霉菌染色体DNA的提取 | 第24页 |
| ·T载体连接反应 | 第24页 |
| ·转化反应与蓝白筛选 | 第24-25页 |
| ·DNA序列的测定 | 第25页 |
| ·PCR反应体系与参数优化 | 第25-26页 |
| ·同源克隆的克隆策略和引物设计 | 第26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-34页 |
| ·PCR扩增片段mai1 | 第26-29页 |
| ·PCR扩增片段mai2 | 第29-31页 |
| ·PCR扩增片段mai3 | 第31-34页 |
| ·小结 | 第34-35页 |
| 第三章 PKS基因序列分析 | 第35-54页 |
| ·实验材料与方法 | 第35页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·实验工具与方法 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-53页 |
| ·mai-PKS序列的Frame分析 | 第35-37页 |
| ·mai-PKS序列的Blast分析 | 第37-42页 |
| ·限制性内切酶分析 | 第42-43页 |
| ·mai-MT基因功能分析 | 第43-46页 |
| ·mai-KS1 基因功能分析 | 第46-48页 |
| ·mai-ACP基因功能分析 | 第48-50页 |
| ·mai-KS2 基因功能分析 | 第50-52页 |
| ·序列mai-PKS内KS基因功能分析 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第四章 β-酮酰基合成酶基因功能研究 | 第54-63页 |
| ·材料与方法 | 第54-56页 |
| ·实验材料与仪器 | 第54-55页 |
| ·菌种和质粒 | 第54页 |
| ·生化试剂和仪器 | 第54-55页 |
| ·藤黄灰链霉菌的原生质体制备 | 第55页 |
| ·穿梭质粒的构建 | 第55页 |
| ·mai-KS2 阻断株构建 | 第55-56页 |
| ·次生代谢产物的提取 | 第56页 |
| ·生物活性检验 | 第56页 |
| ·液质分离与鉴定 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-62页 |
| ·mai-KS2 基因阻断株的构建 | 第56-57页 |
| ·生物活性检测 | 第57-59页 |
| ·次生代谢产物TIC图分析 | 第59页 |
| ·次生代谢产物质谱分析 | 第59-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第五章 总结和展望 | 第63-70页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| ·展望 | 第64-70页 |
| 附录1:全部基因序列信息 | 第70-72页 |
| 致 谢 | 第72页 |
