中文摘要 | 第1-3页 |
外文摘要 | 第3-4页 |
缩略词 | 第4-16页 |
第1章 引言 | 第16-38页 |
·无融合生殖现象及甜菜单体附加系M_(14)的获得 | 第16-20页 |
·分离差异表达基因的方法 | 第20-38页 |
·mRNA差异显示分析(Differential Display, DD) | 第21-22页 |
·抑制消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization, SSH) | 第22-30页 |
·表达序列标签(Expressed Sequense Tag, EST) | 第30-35页 |
·基因表达序列分析(Serial Analysis of Gene Expression, SAGE) | 第35-36页 |
·基因芯片技术(DNA chip technique) | 第36-38页 |
第2章 材料和方法 | 第38-49页 |
·植物材料 | 第38-39页 |
·甜菜花蕾总RNA提取 | 第39页 |
·甜菜花蕾mRNA的分离 | 第39-40页 |
·cDNA抑制消减杂交 | 第40-45页 |
·M_(14)和A_(2Y)的cDNA第一链合成 | 第40-41页 |
·M_(14)和A_(2Y)的cDNA第二链合成 | 第41页 |
·Rsa Ⅰ酶切 | 第41-42页 |
·连接头 | 第42页 |
·第一轮杂交 | 第42-43页 |
·第二轮杂交 | 第43页 |
·第一轮PCR扩增 | 第43-44页 |
·第二轮PCR扩增(巢式PCR扩增) | 第44-45页 |
·PCR产物与pMD18-T Vector(TaKaRa)的连接 | 第45-46页 |
·连接产物的转化 | 第46-47页 |
·制备LB-Amp琼脂平板和SOC培养基 | 第46页 |
·转化 | 第46-47页 |
·细菌的扩增与冻存 | 第47页 |
·克隆产物的PCR鉴定 | 第47-48页 |
·克隆产物测序 | 第48页 |
·将所获得EST序列与GenBank进行同源性比较 | 第48-49页 |
第3章 结果 | 第49-55页 |
·总RNA提取结果 | 第49页 |
·RNA浓度及纯度的确定 | 第49-50页 |
·mRNA提取结果 | 第50页 |
·抑制消减杂交结果 | 第50-52页 |
·cDNA双链结果 | 第50-51页 |
·Rsa Ⅰ酶切结果 | 第51-52页 |
·消减杂交后产物的第一轮、第二轮PCR扩增结果 | 第52页 |
·构建EST库结果 | 第52-55页 |
·蓝白筛选结果 | 第52-53页 |
·克隆产物的PCR鉴定结果 | 第53-54页 |
·EST的测序结果 | 第54-55页 |
第4章 讨论 | 第55-60页 |
·实验中应注意的具体事项 | 第55-58页 |
·获得无RNA酶环境 | 第55-56页 |
·mRNA的完整性 | 第56页 |
·酶切的有效性 | 第56页 |
·接头连接的高效性 | 第56-57页 |
·在转化过程中的注意事项 | 第57-58页 |
·本实验的主要局限性 | 第58页 |
·后续工作思路 | 第58-60页 |
攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第60-61页 |
附录1 | 第61-100页 |
致谢 | 第100-101页 |
参考文献 | 第101-108页 |
独创性声明 | 第108页 |