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利用抑制消减杂交法对甜菜无融合生殖系花期表达基因的研究

中文摘要第1-3页
外文摘要第3-4页
缩略词第4-16页
第1章 引言第16-38页
   ·无融合生殖现象及甜菜单体附加系M_(14)的获得第16-20页
   ·分离差异表达基因的方法第20-38页
     ·mRNA差异显示分析(Differential Display, DD)第21-22页
     ·抑制消减杂交(Suppression Subtractive Hybridization, SSH)第22-30页
     ·表达序列标签(Expressed Sequense Tag, EST)第30-35页
     ·基因表达序列分析(Serial Analysis of Gene Expression, SAGE)第35-36页
     ·基因芯片技术(DNA chip technique)第36-38页
第2章 材料和方法第38-49页
   ·植物材料第38-39页
   ·甜菜花蕾总RNA提取第39页
   ·甜菜花蕾mRNA的分离第39-40页
   ·cDNA抑制消减杂交第40-45页
     ·M_(14)和A_(2Y)的cDNA第一链合成第40-41页
     ·M_(14)和A_(2Y)的cDNA第二链合成第41页
     ·Rsa Ⅰ酶切第41-42页
     ·连接头第42页
     ·第一轮杂交第42-43页
     ·第二轮杂交第43页
     ·第一轮PCR扩增第43-44页
     ·第二轮PCR扩增(巢式PCR扩增)第44-45页
   ·PCR产物与pMD18-T Vector(TaKaRa)的连接第45-46页
   ·连接产物的转化第46-47页
     ·制备LB-Amp琼脂平板和SOC培养基第46页
     ·转化第46-47页
   ·细菌的扩增与冻存第47页
   ·克隆产物的PCR鉴定第47-48页
   ·克隆产物测序第48页
   ·将所获得EST序列与GenBank进行同源性比较第48-49页
第3章 结果第49-55页
   ·总RNA提取结果第49页
   ·RNA浓度及纯度的确定第49-50页
   ·mRNA提取结果第50页
   ·抑制消减杂交结果第50-52页
     ·cDNA双链结果第50-51页
     ·Rsa Ⅰ酶切结果第51-52页
     ·消减杂交后产物的第一轮、第二轮PCR扩增结果第52页
   ·构建EST库结果第52-55页
     ·蓝白筛选结果第52-53页
     ·克隆产物的PCR鉴定结果第53-54页
     ·EST的测序结果第54-55页
第4章 讨论第55-60页
   ·实验中应注意的具体事项第55-58页
     ·获得无RNA酶环境第55-56页
     ·mRNA的完整性第56页
     ·酶切的有效性第56页
     ·接头连接的高效性第56-57页
     ·在转化过程中的注意事项第57-58页
   ·本实验的主要局限性第58页
   ·后续工作思路第58-60页
攻读硕士学位期间所发表的论文第60-61页
附录1第61-100页
致谢第100-101页
参考文献第101-108页
独创性声明第108页

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