胸腺肽基因转化生菜及转基因生菜的筛选与鉴定
| 第一章 文献综述 | 第1-36页 |
| 1 植物基因转移技术的研究进展 | 第10-16页 |
| ·目的基因的分离和鉴定 | 第10-11页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第11页 |
| ·植物转基因方法 | 第11-14页 |
| ·以载体为媒介的间接导入法 | 第12-13页 |
| ·外源基因的直接导入法 | 第13-14页 |
| ·转基因植物的筛选与鉴定 | 第14-16页 |
| ·利用抗性基因及报告基因进行筛选 | 第14-15页 |
| ·PCR检测转化植株 | 第15页 |
| ·点杂交和Southern杂交 | 第15-16页 |
| ·Northern杂交 | 第16页 |
| ·Western杂交 | 第16页 |
| 2 利用植物生物反应器生产药用蛋白 | 第16-29页 |
| ·植物生产系统生产药用蛋白的优越性 | 第17-18页 |
| ·植物生物反应器生产药用蛋白的研究进展 | 第18-25页 |
| ·疫苗 | 第18-20页 |
| ·抗体及其片段 | 第20-22页 |
| ·细胞因子 | 第22页 |
| ·酶 | 第22-23页 |
| ·其它药用蛋白和生物活性肽 | 第23-25页 |
| ·提高外源蛋白在植物中表达效率的途径 | 第25-29页 |
| ·植物的转化稳定性 | 第25页 |
| ·启动子的选择和改造 | 第25-26页 |
| ·目的基因的修饰 | 第26-27页 |
| ·构建含有细胞核基质结合区的表达载体 | 第27-28页 |
| ·利用定位信号提高外源基因表达量 | 第28-29页 |
| 3 外源基因在转基因植物中的表达和遗传稳定性 | 第29-33页 |
| ·外源基因在转基因植物中的表达 | 第29-31页 |
| ·DNA甲基化与转基因失活 | 第29-30页 |
| ·共抑制 | 第30-31页 |
| ·影响转基因表达的外在因素 | 第31页 |
| ·影响基因表达的其它因素 | 第31页 |
| ·转化植株中外源基因的遗传稳定性及遗传规律 | 第31-33页 |
| ·外源基因在转基因植株的遗传传递中的稳定性 | 第31-32页 |
| ·外源基因的遗传规律 | 第32页 |
| ·转化方法对转化基因遗传方式的影响 | 第32-33页 |
| 4 转基因植物的风险性和安全性 | 第33-34页 |
| ·转基因植物的环境安全性 | 第33页 |
| ·转基因植物的食品安全性 | 第33-34页 |
| 5 胸腺肽的研究进展 | 第34页 |
| 6 本研究的目的及意义 | 第34-36页 |
| 第二章 材料和方法 | 第36-43页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| ·菌种和质粒 | 第36-37页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-43页 |
| ·表达载体质粒对根癌农杆菌的转化 | 第37-38页 |
| ·质粒的提取 | 第37-38页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·表达载体转化根癌农杆菌 | 第38页 |
| ·生菜植株高频率再生转化体系的建立 | 第38-39页 |
| ·生菜无菌苗的培养 | 第38-39页 |
| ·生菜高效诱芽培养基的确定 | 第39页 |
| ·Kan选择压的确定 | 第39页 |
| ·Carb浓度的确定 | 第39页 |
| ·胸腺肽基因对生菜的遗传转化及抗性植株的筛选 | 第39-40页 |
| ·根癌农杆菌介导的叶盘法转化生菜 | 第39-40页 |
| ·Kan抗性植株的筛选 | 第40页 |
| ·诱导生根 | 第40页 |
| ·无菌苗的移栽 | 第40页 |
| ·转基因植株的检测和扩繁 | 第40-43页 |
| ·植株基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第41页 |
| ·探针的标记 | 第41页 |
| ·Southern杂交 | 第41-42页 |
| ·RNA的提取 | 第42页 |
| ·转基因植株的RT-PCR检测 | 第42页 |
| ·转基因植株的扩繁 | 第42页 |
| ·扩繁植株的PCR检测 | 第42-43页 |
| 第三章 结果与分析 | 第43-50页 |
| 1 大速生散叶生菜再生体系的建立 | 第43-46页 |
| ·生菜品种的选择 | 第43页 |
| ·不同激素浓度对大速生散叶生菜子叶再生率的影响 | 第43-44页 |
| ·大速生散叶生菜抗生素敏感性测定 | 第44-46页 |
| ·转基因生菜Kan选择压的确定 | 第45页 |
| ·Carb对生菜子叶外植体再生的影响 | 第45-46页 |
| 2 转化农杆菌的鉴定 | 第46-47页 |
| 3 Kan抗性植株的获得 | 第47页 |
| 4 抗性植株的PCR检测 | 第47页 |
| 5 thy在生菜基因组中的整合 | 第47-48页 |
| ·探针的标记效果 | 第47-48页 |
| ·阳性植株的Southern杂交 | 第48页 |
| 6 thy在转基因生菜中的转录表达 | 第48-49页 |
| 7 转基因生菜的扩繁 | 第49-50页 |
| 第四章 讨论 | 第50-52页 |
| 1 影响生菜再生的因素 | 第50页 |
| 2 影响生菜子叶转化的因素 | 第50-51页 |
| 3 胸腺肽基因的遗传转化 | 第51-52页 |
| 第五章 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-64页 |
| 附图 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
