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Cx43 RNA干扰防治脑血管痉挛的体内实验研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-12页
第一章 引言第12-15页
第二章 实验材料与仪器第15-20页
   ·实验动物第15页
   ·实验试剂第15-19页
     ·主要购置试剂第15-16页
     ·主要配置试剂第16-19页
   ·实验仪器第19-20页
第三章 实验方法第20-30页
   ·RNA 干扰腺病毒载体的构建第20页
   ·重组腺病毒载体转染效率的观察第20-21页
   ·体内实验的分组第21-22页
   ·实验动物体内CVS 模型的建立第22-23页
   ·测定建立模型后Cx43 mRNA 及蛋白表达的变化第23页
   ·脑基底动脉造影及血管直径的测量第23页
   ·RT-PCR 技术测定Cx43 mRNA 表达的变化第23-26页
     ·提取总RNA第23-24页
     ·总RNA 样品质量分析第24页
     ·逆转录第24-25页
     ·PCR 扩增第25页
     ·配制1.596琼脂糖凝胶第25-26页
     ·PCR 产物水平电泳第26页
     ·观察结果并拍照第26页
   ·Western blotting 技术测定Cx43 蛋白表达的变化第26-29页
     ·总蛋白样品制备第26页
     ·样品蛋白含量的测定第26-27页
     ·配制5%积层胶及8%分离第27页
     ·灌胶及上样第27-28页
     ·垂直电泳第28页
     ·转膜第28页
     ·目标蛋白免疫反应第28页
     ·目标蛋白化学发光及曝光第28-29页
     ·膜再生第29页
     ·内参蛋白免疫反应第29页
     ·内参蛋白化学发光及曝光第29页
     ·图像分析第29页
   ·光镜下血管壁组织形态学观察的变化第29页
   ·数据统计分析第29-30页
第四章 实验结果第30-35页
   ·RNA 干扰重组腺病毒载体的构建第30页
   ·重组腺病毒载体转染效率的观察第30-31页
   ·动物体内CVS 模型的建立第31-32页
   ·建立模型后Cx43 mRNA 及蛋白表达的变化第32页
   ·预处理组实验第32-34页
   ·处理组实验第34-35页
第五章 讨论第35-41页
   ·蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)第35页
   ·CVS 的研究仍存在的问题第35-36页
     ·目前机制仍不明第35-36页
     ·CVS 治疗的研究有很多,但无特效或存在争议第36页
     ·我们的前期研究中存在的问题第36页
   ·缝隙连接(GJ)第36-38页
     ·细胞GJ 的功能第37页
     ·细胞GJ 功能的调节第37-38页
     ·Cx43 表达在GJ 功能变化中的作用第38页
   ·RNA 干扰(RNAi)技术及其应用第38-39页
   ·Cx43 在CVS 中表达变化的机制及RNAi 防治CVS 的前景第39-41页
第六章 结论第41-42页
致谢第42-43页
参考文献第43-46页
附图第46-56页
综述第56-65页
攻读学位期间的研究成果第65页

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