| 缩略词汇总 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-25页 |
| 1 锥栗研究现状 | 第13-14页 |
| 2 开花相关基因的研究 | 第14-18页 |
| ·植物成花途径及基因分类 | 第14-17页 |
| ·控制开花时间的基因 | 第15-16页 |
| ·花分生组织特征基因 | 第16-17页 |
| ·花器官特征基因 | 第17页 |
| ·定域基因 | 第17页 |
| ·LFY 基因及其同源基因的作用 | 第17-18页 |
| 3 基因差异表达所用的分离方法 | 第18-22页 |
| ·DDRT-PCR 技术 | 第18-19页 |
| ·RDA 技术 | 第19页 |
| ·SSH 技术 | 第19页 |
| ·SAGE 技术 | 第19-20页 |
| ·cDNA 微列阵(cDNA microarray) | 第20页 |
| ·cDNA-AFLP 技术 | 第20-22页 |
| 4 研究意义 | 第22-23页 |
| 5 研究路线 | 第23-25页 |
| 第二章 锥栗花序总 RNA 提取及 cDNA-AFLP 体系建立 | 第25-49页 |
| 1 试验材料 | 第25-26页 |
| ·植物材料的准备 | 第25页 |
| ·仪器及耗材 | 第25-26页 |
| ·主要生化试剂 | 第26页 |
| 2 试验方法 | 第26-36页 |
| ·锥栗花序总 RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·改良 CTAB 法 | 第26-27页 |
| ·其它总 RNA 提取法 | 第27页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第27-28页 |
| ·cDNA 第二链的合成及纯化 | 第28页 |
| ·双链 cDNA 的的合成 | 第28页 |
| ·双链 cDNA 的纯化 | 第28页 |
| ·酶切与接头连接 | 第28-29页 |
| ·预扩增 | 第29-30页 |
| ·选择性扩增体系的筛选 | 第30-32页 |
| ·模板浓度筛选 | 第31页 |
| ·dNTP 浓度筛选 | 第31-32页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| ·丙烯酰胺凝胶的制备 | 第32页 |
| ·胶板处理 | 第32页 |
| ·灌胶 | 第32页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第32-33页 |
| ·银染 | 第33页 |
| ·脱色 | 第33页 |
| ·染色 | 第33页 |
| ·显影 | 第33页 |
| ·差异条带的回收纯化与测序分析 | 第33-36页 |
| ·二次扩增 | 第34页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第34-35页 |
| ·平板制作 | 第35页 |
| ·载体连接 | 第35页 |
| ·转化 | 第35-36页 |
| ·摇菌及菌液验证 | 第36页 |
| ·cDNA 的测序工作及序列的分析 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-43页 |
| ·锥栗花序总 RNA 提取 | 第36-38页 |
| ·二次模板的检测 | 第38-39页 |
| ·选择性扩增的模板浓度、dNTP 浓度的筛选 | 第39-40页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶差异片段的选择 | 第40-41页 |
| ·二次扩增的琼脂糖胶检测 | 第41页 |
| ·测序结果及功能分析 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-49页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第43-45页 |
| ·酶切的关键性 | 第45页 |
| ·体系构建 | 第45-46页 |
| ·电泳及银染的注意细节 | 第46-47页 |
| ·差异片段测序结果讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 LFY 基因的克隆 | 第49-63页 |
| 1 试验材料 | 第49页 |
| ·植物材料的准备 | 第49页 |
| ·仪器及耗材 | 第49页 |
| ·主要生化试剂 | 第49页 |
| 2 试验方法 | 第49-53页 |
| ·LFY 基因片段的克隆 | 第49-51页 |
| ·锥栗花序总 RNA 的提取 | 第49页 |
| ·逆转录 | 第49页 |
| ·引物设计 | 第49-50页 |
| ·LFY 基因片段的 PCR 扩增 | 第50页 |
| ·连接转化 | 第50页 |
| ·摇菌及菌液验证 | 第50-51页 |
| ·测序及分析(方法同第二章 2.10) | 第51页 |
| ·RACE 克隆 | 第51-53页 |
| ·3'RACE 的引物 | 第51页 |
| ·3'RACE 所需 cDNA 的准备 | 第51页 |
| ·3'RACE 的首轮 PCR 扩增 | 第51-52页 |
| ·3'RACE 的次轮 PCR 扩增 | 第52页 |
| ·条带回收 | 第52页 |
| ·连接及转化 | 第52页 |
| ·摇菌及菌液验证 | 第52页 |
| ·测序及分析 | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-61页 |
| ·LFY 基因片段的克隆 | 第53-54页 |
| ·LFY 基因片段 3'RACE | 第54-55页 |
| ·首轮扩增 | 第54-55页 |
| ·次轮扩增 | 第55页 |
| ·测序结果与分析 | 第55-61页 |
| ·锥栗花序 LFY 基因片段测序结果分析 | 第55-57页 |
| ·3'RACE 的测序结果分析 | 第57-58页 |
| ·拼接 | 第58-61页 |
| 4 讨论及展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 附录(试验药品配方及使用说明、图片) | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79页 |