| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| 材料与方法 | 第12-28页 |
| 1 菌株及其来源 | 第12页 |
| 2 培养基 | 第12-14页 |
| 3 试剂 | 第14-15页 |
| 4 主要设备与器材 | 第15-17页 |
| 5 实验方法 | 第17-28页 |
| ·单倍体的获得 | 第17-18页 |
| ·诱导孢子形成的方法 | 第17页 |
| ·子囊孢子分离和单倍体的获得 | 第17页 |
| ·单倍体的鉴定 | 第17-18页 |
| ·单倍体交配型的确定 | 第18页 |
| ·基因敲除方法 | 第18-19页 |
| ·DNA分子操作 | 第19-22页 |
| ·PCR扩增反应 | 第19-20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳法检测DNA | 第20页 |
| ·DNA片段的回收与纯化 | 第20-21页 |
| ·DNA的酶切反应 | 第21页 |
| ·DNA连接反应 | 第21-22页 |
| ·转化方法 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的酵母转化 | 第23页 |
| ·DNA的提取方法 | 第23-25页 |
| ·细菌DNA的提取方法 | 第23-24页 |
| ·质粒的提取 | 第24页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·菌株酒精发酵力的测定 | 第25-27页 |
| ·糖化醪的制作(双酶法) | 第25页 |
| ·发酵工艺流程 | 第25-26页 |
| ·酒精发酵相关参数的测定 | 第26-27页 |
| ·数据处理 | 第27-28页 |
| 结果与讨论 | 第28-45页 |
| 1 单倍体菌株的获得 | 第28-30页 |
| 2 单倍体菌株酒精发酵力分析 | 第30-31页 |
| 3 URA3基因的敲除 | 第31-35页 |
| ·URA3作为选择性标记的筛选原理 | 第31-32页 |
| ·引物设计与PCR产物验证 | 第32-33页 |
| ·G418浓度及菌浓度对酵母转化筛选的影响 | 第33-34页 |
| ·转化子的验证 | 第34-35页 |
| 4 外源基因gapN在ZSD菌株中的表达 | 第35-38页 |
| ·gapN基因的克隆 | 第35-36页 |
| ·pUG36-gapN重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| ·酿酒酵母重组菌株的筛选鉴定 | 第37页 |
| ·pDB20-gapN在ZSD菌株中的表达 | 第37-38页 |
| 5.重组菌发酵力分析 | 第38-45页 |
| ·pDB20-gapN和pUG36-gapN工程菌的发酵力比较分析 | 第38-39页 |
| ·pUG36-gapN工程菌及相关菌株的发酵力比较分析 | 第39-41页 |
| ·gapN基因引入的代谢流机制解释 | 第41-43页 |
| ·传统选育方法与基因工程改造方法的比较 | 第43-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 综述 | 第46-54页 |
| 一、燃料乙醇 | 第46-47页 |
| 二、代谢工程 | 第47-48页 |
| 三、酿酒酵母 | 第48页 |
| 四、燃料乙醇的代谢工程 | 第48-54页 |
| 1 扩展代谢途径 | 第48-49页 |
| 2 构建新的代谢途径 | 第49-51页 |
| 3 改变能量代谢途径 | 第51-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60页 |