rhFSH工程细胞株的筛选及表达条件优化
| 研究提要 | 第1-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-16页 |
| ·人促卵泡激素(hFSH)研究背景简介 | 第7-9页 |
| ·人促卵泡激素(hFSH)介绍 | 第7页 |
| ·人促卵泡激素(hFSH)结构特点 | 第7-9页 |
| ·人促卵泡激素(hFSH)研究现状 | 第9-10页 |
| ·重组人促卵泡激素(rhFSH)研究现状 | 第10-12页 |
| ·CHO细胞表达系统简介 | 第12-14页 |
| ·CHO细胞简介 | 第12-13页 |
| ·CHO细胞的无血清培养 | 第13-14页 |
| ·本论文的立体依据及研究意义 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-29页 |
| ·实验材料 | 第16-19页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·常用试剂配制 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-29页 |
| ·质粒的小量提取 | 第19-20页 |
| ·限制性内切酶作用 | 第20-21页 |
| ·从低熔点琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第21页 |
| ·连接反应 | 第21页 |
| ·大肠杆菌E.coli感受态的制备 | 第21-22页 |
| ·连接产物转化E.coli感受态细胞 | 第22页 |
| ·质粒DNA转化E.coli感受态细胞 | 第22-23页 |
| ·PCR | 第23-24页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第24-25页 |
| ·细胞转染 | 第25页 |
| ·亲和柱的制备 | 第25-26页 |
| ·IEF测定等电点 | 第26-27页 |
| ·唾液酸含量 | 第27页 |
| ·ELISA | 第27-28页 |
| ·体内生物(比)活性测定(卵巢增重法) | 第28-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-54页 |
| ·rhFSH基因结构 | 第29-30页 |
| ·rhFSHα基因结构及氨基酸序列 | 第29-30页 |
| ·rhFSHβ基因结构及氨基酸序列 | 第30页 |
| ·表达载体的选择 | 第30-32页 |
| ·rhFSH基因的克隆及表达载体的构建 | 第32-37页 |
| ·人FSHα亚基基因内含子序列的克隆 | 第32页 |
| ·人FSHα亚基cDNA序列的克隆 | 第32-33页 |
| ·人FSHβ亚基基因序列的克隆 | 第33-35页 |
| ·重组人FSHα亚基表达载体的构建 | 第35页 |
| ·重组人FSHβ亚基表达载体的构建 | 第35-37页 |
| ·rhFSH表达细胞株的建立 | 第37-40页 |
| ·宿主细胞 | 第37页 |
| ·表达细胞株的建立 | 第37-40页 |
| ·rhFSH表达细胞株表达条件的优化 | 第40-46页 |
| ·温度对细胞表达的影响 | 第40-42页 |
| ·不同培养方式对细胞表达的影响 | 第42-44页 |
| ·不同培养基对细胞表达的影响 | 第44-45页 |
| ·rhFSH工程细胞株最佳表达条件 | 第45-46页 |
| ·rhFSH纯化 | 第46-48页 |
| ·离心超滤 | 第46页 |
| ·亲和层析 | 第46-47页 |
| ·S-200层析 | 第47-48页 |
| ·rhFSH检定 | 第48-53页 |
| ·ELISA检测 | 第48页 |
| ·表观分子量检定 | 第48-49页 |
| ·等电聚焦电泳原液鉴定结果 | 第49-50页 |
| ·HPLC结果 | 第50-51页 |
| ·rhFSH唾液酸含量检测 | 第51-52页 |
| ·rhFSH原液体内生物活性测定 | 第52-53页 |
| ·工作展望 | 第53-54页 |
| ·实现细胞大规模培养 | 第53页 |
| ·完善检定方法 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 中文摘要 | 第59-61页 |
| Abstract | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
