| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·禾谷镰刀菌基本生物学特征 | 第12-13页 |
| ·禾谷镰刀菌的致病机制 | 第13-15页 |
| ·禾谷镰刀菌次生代谢物——真菌毒素 | 第15页 |
| ·禾谷镰刀菌致病力鉴定方法 | 第15-16页 |
| ·禾谷镰刀菌基因组结构及种群体动态学研究 | 第16-17页 |
| ·禾谷镰刀菌功能基因组学研究进展 | 第17-18页 |
| ·有关酿酒酵母基因组学的简要概述 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 FgTEP1 基因敲除质粒的构建 | 第21-29页 |
| ·材料与方法 | 第21-22页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·培养基及主要试剂配方 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·PH-1 菌株基因组DNA 的提取―CTAB 法 | 第22-23页 |
| ·FgTEP1 基因旁侧两同源片断的定向克隆 | 第23-25页 |
| ·G418 抗性基因的克隆 | 第25页 |
| ·生物信息学方法 | 第25页 |
| ·结果与分析 | 第25-28页 |
| ·FgTEP1 基因序列比较 | 第25-26页 |
| ·pMDa+b+G418 敲除质粒的构建 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| ·选择抗性标记的意义 | 第28页 |
| ·敲除质粒的构建 | 第28-29页 |
| 第三章 FgTEP1 基因敲除及功能分析 | 第29-40页 |
| ·材料与方法 | 第29-31页 |
| ·供试材料与试剂 | 第29页 |
| ·培养基及主要试剂配方 | 第29-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-33页 |
| ·PEG-CaC12 介导转化PH-1 原质生体 | 第31页 |
| ·G418 抗性筛选转化子 | 第31页 |
| ·转化子Fgtep1-t 基因型鉴定 | 第31-32页 |
| ·Fgtep1-t 的平板表型实验 | 第32页 |
| ·Fgtep1-t 产孢量的测定 | 第32-33页 |
| ·Fgtep1-t 分生孢子萌发率的测定 | 第33页 |
| ·Fgtep1-t 的致病性检测 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-38页 |
| ·通过对FgTEP1 基因敲除，获得两个Fgtep1-t 缺失株 | 第33-35页 |
| ·Fgtep1-t 缺失株对锂离子敏感 | 第35-36页 |
| ·Fgtep1-t 缺失株的分生孢子产量显著下降 | 第36-37页 |
| ·Fgtep1-t 缺失株分生孢子的萌发受涡曼青霉素强烈抑制 | 第37-38页 |
| ·Fgtep1-t 缺失株的致病力减弱 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 FgTEP1 基因功能回复验证 | 第40-47页 |
| ·材料与方法 | 第40页 |
| ·供试材料与试剂 | 第40页 |
| ·培养基、主要试剂配方及主要实验仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-41页 |
| ·pUC-hph-FgTEP1 回复质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·pUC-hph-FgTEP1 回复质粒转化缺失Fgtep1-t 原生质体 | 第41页 |
| ·互补转化体的筛选 | 第41页 |
| ·回复转化体的基因型鉴定 | 第41页 |
| ·回复转化体的表型实验 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-46页 |
| ·pUC-hph-FgTEP1 回复质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·FgTEP1-rt 回复转化体基因型检测 | 第42-43页 |
| ·FgTEP1 基因功能的互补验证 | 第43-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 FgTEP1-ORF 互补酿酒酵母 SCTEP1 基因缺失株 | 第47-54页 |
| ·材料与方法 | 第47-48页 |
| ·供试材料与试剂 | 第47页 |
| ·培养基及主要试剂配方 | 第47页 |
| ·主要实验仪器及耗材 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·PH-1 总RNA 的提取—Trizol 法 | 第48页 |
| ·RT-PCR 获得PH-1 的cDNA | 第48页 |
| ·FgTEP1-ORF 的PCR 扩增 | 第48-49页 |
| ·ADHpt-TEP1(ORF) 互补质粒的构建 | 第49页 |
| ·酵母感受态的制备及转化 | 第49-50页 |
| ·互补验证FgTEP1 基因的功能 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-52页 |
| ·RT-PCR 获得无Intron 的FgTEP1-ORF | 第50-51页 |
| ·ADHpt-TEP1(ORF)互补质粒的酶切验证及转化 | 第51-52页 |
| ·功能互补验证结果 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第六章 全文结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
