| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 第一部分 引言 | 第10-11页 |
| 第二部分 文献综述 | 第11-22页 |
| 1. 植物锌结合脱氢酶 | 第11-17页 |
| ·乙醇脱氢酶的克隆及其功能研究 | 第11-14页 |
| ·植物乙醇脱氢酶的克隆 | 第11页 |
| ·乙醇脱氢酶的功能研究 | 第11-14页 |
| ·山梨醇脱氢酶的克隆及其功能研究 | 第14-15页 |
| ·植物山梨醇脱氢酶基因的克隆 | 第14-15页 |
| ·山梨醇脱氢酶的功能研究 | 第15页 |
| ·谷氨酸脱氧酶的克隆及其功能研究 | 第15-16页 |
| ·谷氨酸脱氧酶基因的克隆 | 第16页 |
| ·谷氨酸脱氧酶的功能研究 | 第16页 |
| ·葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的克隆及其功能研究 | 第16-17页 |
| ·葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因的克隆 | 第16-17页 |
| ·葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的功能研究 | 第17页 |
| 2. 植物中的其他重要含锌酶 | 第17-20页 |
| ·碳酸酐酶 | 第18页 |
| ·碳酸酐酶在干旱中的表现 | 第18页 |
| ·碳酸酐酶在光照、高盐、高温、缺氮、缺钾环境中的活性变化 | 第18页 |
| ·超氧化物歧化酶 | 第18-20页 |
| ·SOD基因的克隆 | 第19页 |
| ·棉花中SOD研究进展 | 第19-20页 |
| 3. 生物信息学概述 | 第20-22页 |
| ·序列片段的拼接 | 第20-21页 |
| ·基因区域的预测 | 第21页 |
| ·基因功能预测 | 第21页 |
| ·分子进化的研究 | 第21-22页 |
| 第三部分 乙醇脱氢酶(ADH)家族生物信息学分析 | 第22-32页 |
| 1.前言 | 第22-23页 |
| 2.材料和方法 | 第23-24页 |
| ·数据来源与获取 | 第23页 |
| ·数据处理与计算机软件 | 第23-24页 |
| ·保守结构域预测 | 第23页 |
| ·二级结构预测 | 第23-24页 |
| ·多重序列比对和系统树构建 | 第24页 |
| 3.结果与分析 | 第24-30页 |
| ·ADH的保守结构域分析 | 第24-25页 |
| ·玉米等物种中MDH的二级结构分析 | 第25-28页 |
| ·玉米等物种中ADH的多重序列比对和进化关系分析 | 第28-30页 |
| 4.讨论 | 第30-31页 |
| 5.小结 | 第31-32页 |
| 第四部分 一个新的百脉根乙醇脱氢酶基因(LcADH(t))的in silico注释 | 第32-40页 |
| 1.前言 | 第32页 |
| 2.材料和方法 | 第32-33页 |
| ·数据序列来源与获取 | 第32-33页 |
| ·数据处理与计算机软件 | 第33页 |
| ·LcADH(t)保守结构域预测 | 第33页 |
| ·LcADH(t)二级结构预测 | 第33页 |
| ·LcADH(t)与其他物种的多重序列比对和进化树构建 | 第33页 |
| 3.结果与分析 | 第33-38页 |
| ·LcADH(t)的保守结构域分析 | 第33-34页 |
| ·LcADH(t)的二级结构分析 | 第34-37页 |
| ·LcADH(t)与其他物种的多重序列比对和进化树分析 | 第37-38页 |
| 4.讨论 | 第38-39页 |
| 5.小结 | 第39-40页 |
| 第五部分:陆地棉锌结合脱氢酶基因克隆及生物信息学分析 | 第40-54页 |
| 1.前言 | 第40页 |
| 2.材料和方法 | 第40-45页 |
| ·试验材料 | 第40-41页 |
| ·供试植物材料 | 第40页 |
| ·棉花EST序列的获得 | 第40-41页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第41页 |
| ·制备大肠杆菌感受态细胞所需试剂 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-45页 |
| ·基于EST的in silico分析及引物设计 | 第41-42页 |
| ·棉花总RNA的提取 | 第42-43页 |
| ·RNA反转录成cDNA | 第43页 |
| ·PCR以及产物的回收 | 第43页 |
| ·连接与转化 | 第43-44页 |
| ·重组质粒DNA的提取与酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·锌结合脱氢酶基因的序列对比和分析 | 第45页 |
| ·推导氨基酸序列的保守结构域预测以及二级结构预测 | 第45页 |
| 3.结果与分析 | 第45-52页 |
| ·棉花锌结合脱氢酶基因(GhZBDH)的克隆 | 第45-46页 |
| ·棉花锌结合脱氢酶蛋白基因(GhZBDH)的序列对比和分析 | 第46-48页 |
| ·棉花ZBDH的功能预测 | 第48-52页 |
| ·棉花锌结合脱氢酶(GhZBDH)的保守结构域预测以及二级结构预测 | 第48-52页 |
| 4.讨论 | 第52页 |
| 5.小结 | 第52-54页 |
| 第六部分:棉花锌结合脱氢酶(GhZBDH)的原核表达与蛋白纯化 | 第54-62页 |
| 1.前言 | 第54页 |
| 2.材料与方法 | 第54-57页 |
| ·材料与试剂 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·原核表达载体pQE 30-GhV3构建及转化 | 第55-56页 |
| ·His-V3融合蛋白的小量诱导表达 | 第56页 |
| ·棉花锌结合脱氢酶蛋白在大肠杆菌中的大量表达与纯化 | 第56-57页 |
| 3.结果与分析 | 第57-60页 |
| ·原核表达载体pQE 30-GhV3构建、转化及鉴定 | 第57-58页 |
| ·pQE 30-GhV3融合蛋白的小量诱导表达 | 第58-59页 |
| ·棉花锌结合脱氢酶蛋白在M15中的大量表达与纯化 | 第59-60页 |
| 4.讨论 | 第60页 |
| 5.小结 | 第60-62页 |
| 第七部分:讨论 | 第62-67页 |
| 1.ADH的进化历史 | 第62页 |
| 2.基于全基因组测序数据注释新基因——百脉根的LcADH(t) | 第62页 |
| 3.基于全基因组测序数据PCR克隆新基因——棉花的GhZBDH | 第62-63页 |
| 4.GhADH在棉花抗黄萎病过程中执行什么功能? | 第63-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 附录1 | 第77-78页 |
| 附录2 | 第78-79页 |
| 附录3:图版 | 第79-89页 |
| 致谢 | 第89-92页 |
