| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 插图和附表清单 | 第12-13页 |
| 英文缩写词表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-34页 |
| ·HCV的生物学特征 | 第15-18页 |
| ·HCV形态和理化性质 | 第15页 |
| ·HCV基因组结构与功能 | 第15-18页 |
| ·HCV 5’和3’非编码区(UTR) | 第17页 |
| ·HCV蛋白质的加工及功能 | 第17-18页 |
| ·HCV的流行病学 | 第18-20页 |
| ·HCV流行状况 | 第18-19页 |
| ·HCV的传播 | 第19-20页 |
| ·HCV的检测技术的发展 | 第20-23页 |
| ·HCV抗体检测 | 第21-22页 |
| ·HCV核心抗原检测 | 第22-23页 |
| ·HCV核酸检测 | 第23页 |
| ·HCV核心蛋白的性质及其体外表达的特点 | 第23-24页 |
| ·抗体技术 | 第24-32页 |
| ·抗体简介 | 第24-27页 |
| ·抗体的形成机制 | 第27-28页 |
| ·影响抗体产生的因素 | 第28-29页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第29-30页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第30-32页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第32-33页 |
| ·实验技术路线图 | 第33-34页 |
| 第二章 HCV“截短型”核心蛋白基因重组表达载体的构建 | 第34-45页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·菌株与载体 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要试剂配制 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·HCV“截短型”核心蛋白(Core125)基因的引物设计 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增 | 第36页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第36页 |
| ·PET28a质粒DNA的制备 | 第36-37页 |
| ·PCR产物及PET28a质粒DNA的双酶切和胶回收 | 第37页 |
| ·连接反应 | 第37页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·连接产物转化E.coli感受态细胞 | 第38页 |
| ·重组载体PET28a-Core125的筛选及鉴定 | 第38页 |
| ·菌液PCR筛选 | 第38页 |
| ·酶切鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒测序 | 第38页 |
| ·实验结果 | 第38-42页 |
| ·HCV“截短型”核心蛋白(Core125)基因的引物设计 | 第38-39页 |
| ·Core125基因的扩增 | 第39页 |
| ·重组表达载体PET28a-Core125的构建 | 第39-40页 |
| ·重组克隆的筛选及鉴定 | 第40-42页 |
| ·菌液PCR筛选 | 第40-41页 |
| ·酶切鉴定 | 第41页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 HCV“截短型”核心蛋白的原核表达及纯化 | 第45-59页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·菌株及纯化工具 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要试剂配制 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·重组载体PET28a-Core125转化入ROSETTA原核表达宿主菌 | 第47页 |
| ·Core125蛋白在大肠杆菌中的小量诱导表达及可溶性分析 | 第47-48页 |
| ·Core125蛋白在大肠杆菌中的大量诱导表达及镍离子亲和层析柱(Ni~(2+)-NTA)初步纯化 | 第48页 |
| ·初步纯化的Core125蛋白复性及透析 | 第48页 |
| ·Core125蛋白Strep-Tactin系统亲和层析再次纯化 | 第48-49页 |
| ·两次纯化后的Core125蛋白PEG包埋法浓缩 | 第49页 |
| ·浓缩后Core125蛋白BCA法进行定量 | 第49页 |
| ·纯化后Core125蛋白Western blot检测 | 第49页 |
| ·分析Core125蛋白在不同基因型中的保守性和抗原性 | 第49页 |
| ·实验结果 | 第49-56页 |
| ·Core125蛋白的表达情况及可溶性分析 | 第49-50页 |
| ·Core125蛋白Ni~(2+)-NTA亲和层析柱初步纯化结果 | 第50-51页 |
| ·初步纯化的Core125蛋白复性结果 | 第51-52页 |
| ·Core125蛋白Strep-Tactin系统亲和层析再次纯化结果 | 第52页 |
| ·再次纯化后Core125蛋白浓缩 | 第52-53页 |
| ·浓缩后Core125蛋白BCA法定量结果 | 第53页 |
| ·纯化后Core125蛋白Western blot检测 | 第53-54页 |
| ·分析Core125蛋白在不同基因型中的保守性和抗原性 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-59页 |
| 第四章 HCV“截短型”核心蛋白的抗体的制备 | 第59-68页 |
| ·实验材料 | 第59-61页 |
| ·实验动物 | 第59页 |
| ·主要仪器 | 第59-60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·主要试剂配制 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-63页 |
| ·免疫新西兰大白兔 | 第61页 |
| ·多克隆抗体血清的制备 | 第61-62页 |
| ·间接ELISA法检测多克隆抗体血清的效价 | 第62页 |
| ·Western blot法检测多克隆抗体血清的特异性 | 第62页 |
| ·免疫BALB/C小鼠 | 第62-63页 |
| ·BALB/C小鼠免疫效果的检测 | 第63页 |
| ·实验结果 | 第63-65页 |
| ·多克隆抗体的效价ELISA检测 | 第63-64页 |
| ·多克隆抗体的Western blot鉴定 | 第64-65页 |
| ·BALB/C小鼠免疫效果ELISA检测 | 第65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| ·本章小结 | 第67-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第76页 |
