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红菜苔春化作用相关基因及其天然早花突变的分子机理研究

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-12页
1 绪论第12-23页
   ·多种途径影响植物的成花转变第12-13页
   ·春化作用相关基因FLC 的表达调控第13-17页
     ·自主途径(Autonomous Pathway)第14页
     ·PAF1 复合体(PAF1complex)第14-15页
     ·SWR1 复合体(SWR1 complex)第15页
     ·FRI 依赖途径(FRI complex)第15-16页
     ·春化作用途径(Vernalization pathway )第16-17页
     ·影响FLC 表达的其它基因第17页
   ·拟南芥中的天然早花突变体第17-19页
   ·芸苔属中FLC 及天然早花突变体的研究进展第19-20页
   ·研究的目的与内容第20-23页
     ·研究的目的、意义第20-21页
     ·本文研究的主要内容第21-22页
     ·本文的特色与创新之处第22-23页
2 材料与方法第23-41页
   ·材料第23-26页
     ·植物材料第23页
     ·质粒载体与菌株第23页
     ·主要仪器设备第23-24页
     ·主要分子生物学试剂和试剂盒第24页
     ·各种试剂及培养基的配制第24-26页
   ·实验方法第26-29页
     ·种植、样品处理及采集第26-27页
     ·红菜苔和白菜总RNA 提取第27页
     ·红菜苔基因组DNA 提取第27-28页
     ·JM109 感受态细胞的制备—CaC12 法第28页
     ·小量碱裂解法提取质粒DNA第28-29页
     ·核酸的电泳及纯度、浓度测定第29页
   ·BrpFLC 基因cDNA 及其它春化作用相关基因的克隆第29-32页
     ·引物设计第29-30页
     ·RNA 的提取第30页
     ·反转录(RT)第30页
     ·PCR 扩增第30页
     ·PCR 产物的回收和纯化第30-31页
     ·PCR 产物的转化第31页
     ·阳性转化子的鉴定第31-32页
     ·红菜苔BrpFLC 及其它春化作用相关基因序列的分析第32页
   ·BrpFLC 启动子及其内含子I 的克隆第32-34页
     ·引物设计第32-33页
     ·DNA 的提取第33页
     ·BrpFLC1 和BrpFLC2 内含子I、BrpFLC2 启动子的克隆、测序及分析第33页
     ·BrpFRI 的克隆、测序及分析第33-34页
   ·红菜苔BrpFLC 及其它春化作用相关基因表达模式的研究第34-36页
     ·Northern 探针的制备第34页
     ·Northern 杂交第34-35页
     ·半定量RT-PCR第35-36页
   ·RNAi 沉默载体的构建第36-41页
3 结果与分析第41-73页
   ·BrpFLC 基因cDNA 的克隆及其序列分析第41-54页
     ·BrpFLC1 基因cDNA 的克隆及序列分析第41-45页
     ·BrpFLC2 和BrpFLC3 基因cDNA 的克隆和序列分析第45-48页
     ·BrpFLC2 和BrpFLC3 基因cDNA 编码氨基酸序列分析第48-53页
     ·小结第53-54页
   ·BrpFLC 的表达模式的研究第54-57页
     ·BrpFLC 在红菜苔不同组织中的表达第54-55页
     ·春化作用抑制BrpFLC 的表达第55页
     ·红菜苔中春化作用相关基因的克隆及其与春化作用的关系第55-56页
     ·小结第56-57页
   ·红菜苔天然早花突变分子机理的研究第57-67页
     ·红菜苔开花时间研究第57-58页
     ·BrpFLC1 在红菜苔中的剪切紊乱是红菜苔早花突变的主要原因第58-61页
     ·植物开花关键基因FLC 在红菜苔和白菜中的表达差异第61-62页
     ·BrpFLC 启动子区及内含子I 的扩增第62-65页
     ·从红菜苔中克隆BrpFRI 的部分序列第65-67页
     ·小结第67页
   ·红菜苔春化作用关键基因BrpVIN3 片段的克隆及其RNAi 载体的构建第67-73页
     ·红菜苔春化作用关键基因BrpVIN3 片段的克隆第68-69页
     ·红菜苔春化作用关键基因BrpVIN3 RNAi 载体的构建第69-71页
     ·小结第71-73页
4 结论与展望第73-76页
   ·主要结论第73-74页
   ·后续研究工作的建议及展望第74-76页
致谢第76-77页
参考文献第77-83页
附录第83-85页
 A. pBIN19-VIN3 测序结果第83-84页
 B. 红菜苔 FLC1 第五到第七个外显子之间 DNA 序列测序结果第84-85页
 C. 在攻读学位期间发表的论文目录第85页

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