| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-17页 |
| ·Pre-RNA剪接反应机制概述 | 第9-10页 |
| ·剪接体组装中的内含子和外显子的界定 | 第10-11页 |
| ·剪接体的组装过程 | 第11-12页 |
| ·酿酒酵母和拟南芥的剪接顺式作用元件保守序列的比较 | 第12页 |
| ·mRNA前体剪接因子 | 第12-14页 |
| ·SR蛋白 | 第12-13页 |
| ·hnRNP形成因子 | 第13页 |
| ·RNA解旋酶类剪接因子 | 第13-14页 |
| ·内含子在基因表达过程中的作用 | 第14-17页 |
| ·内含子在基因表达调控中的正调控作用 | 第14-15页 |
| ·选择性的保留内含子在基因表达调控中的作用 | 第15页 |
| ·第一个内含子在基因表达调控中的作用 | 第15-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-45页 |
| ·实验材料 | 第17-21页 |
| ·质粒 | 第17页 |
| ·菌种 | 第17页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·酶及化学试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17-18页 |
| ·培养基及试剂配制 | 第18-21页 |
| ·实验方法 | 第21-45页 |
| ·生物信息学分析 | 第21页 |
| ·不同克隆的构建策略 | 第21-23页 |
| ·酵母电转化 | 第23-24页 |
| ·酵母化学转化 | 第24-25页 |
| ·plasmid shuffling | 第25-26页 |
| ·在体外构建RPL36基因点突变 | 第26-27页 |
| ·酵母总RNA抽提 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR | 第28-29页 |
| ·RNA变性电泳 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增拟南芥RPL36B不同克隆的所需片段引物 | 第30-31页 |
| ·pBluescript Ⅱ SK(-)多克隆位点及质粒图谱 | 第31页 |
| ·Touchdown PCR反应体系 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的检测 | 第32-33页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第33-34页 |
| ·拟南芥RPL36B目的片段在SK(-)载体的克隆 | 第34-39页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备和转化 | 第39-40页 |
| ·菌落PCR验证转化结果 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌质粒抽提及酶切验证 | 第41-42页 |
| ·拟南芥RPL36B构建与表达载体prs413的连接 | 第42-45页 |
| 第3章 实验内容和结果 | 第45-59页 |
| ·内含子2级结构的分析 | 第45-46页 |
| ·实验内容 | 第46-54页 |
| ·拟南芥启动子替换成酵母RPL36B启动子 | 第46-47页 |
| ·拟南芥RPL36B基因3'剪切位点替换 | 第47-49页 |
| ·酵母分支位点插入拟南芥第一个内含子 | 第49-51页 |
| ·拟南芥RPL36B第一个内含子替换成酵母RPL36B内含子 | 第51-52页 |
| ·拟南芥RPL36B cDNA的构建 | 第52-53页 |
| ·各种构建生长表达的比较 | 第53-54页 |
| ·拟南芥RPL36B在酿酒酵母中的表达 | 第54-55页 |
| ·含第一个内含子的拟南芥cDNA以及5'剪接位点突变和酵母内含子替换拟南芥内含子的拟南芥cDNA在酵母中的剪接差异 | 第55-56页 |
| ·拟南芥RPL36B的cDNA和酿酒酵母RPL36B的cDNA和含有酵母第一个内含子的LacZ报告基因以及酵母RPL36B外源基因的再次转入 | 第56-57页 |
| ·将拟南芥内含子趋向酵母内含子剪接位点保守区域的突变和替换,并观察其剪接效率 | 第57-59页 |
| 第4章 讨论 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 附录A | 第66-68页 |
| 附录B | 第68-70页 |
