| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-7页 |
| 第一章 综述 | 第7-20页 |
| ·氨基酸的研究历史与应用 | 第7-11页 |
| ·氨基酸的研究历史 | 第7页 |
| ·氨基酸的应用 | 第7-9页 |
| ·蛋氨酸的研究 | 第9-11页 |
| ·氨基酰化酶 | 第11-14页 |
| ·氨基酰化酶的结构与性质 | 第11-12页 |
| ·氨基酰化酶的来源 | 第12页 |
| ·氨基酰化酶的制备方法 | 第12-14页 |
| ·酶和菌体的固定化 | 第14-19页 |
| ·酶和细菌的固定化方法 | 第14-16页 |
| ·菌体的固定化 | 第16页 |
| ·固定化酶的酶学性质 | 第16-18页 |
| ·固定化酶的应用 | 第18-19页 |
| ·本研究目的和研究工作 | 第19-20页 |
| 第二章 嗜热脂肪芽孢杆菌氨基酰化酶基因在E.coli中的克隆和表达 | 第20-29页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·菌种、载体和试剂 | 第20页 |
| ·培养基、试剂和抗生素 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·细菌基因组DNA的抽提 | 第21-22页 |
| ·PCR扩增 | 第22页 |
| ·核酸琼脂糖凝胶电泳与DNA片段的胶回收 | 第22-23页 |
| ·amaA基因在pMD-18T载体上的克隆 | 第23-24页 |
| ·质粒的抽提 | 第24页 |
| ·amaA-pET-28a(+)表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·转化 | 第25-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-28页 |
| ·PCR嗜热脂肪芽孢杆菌氨基酰化酶amaA基因 | 第26-27页 |
| ·氨基酰化酶amaA基因DNA片段鉴定 | 第27页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| 第三章 含amaA酶基因的E.coli工程菌的诱导表达条件研究 | 第29-39页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·菌种和质粒 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-33页 |
| ·样品的预处理 | 第30页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第30-31页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第31-32页 |
| ·酶活的测定 | 第32-33页 |
| ·诱导表达条件的优化研究 | 第33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-38页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳结果 | 第33-34页 |
| ·蛋白标准曲线的制作 | 第34页 |
| ·L-蛋氨酸标准曲线 | 第34-35页 |
| ·amaA基因在E.coli工程菌中的诱导表达结果 | 第35-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第四章 含amaA基因的E.coli工程菌的固定化及其酶学性质研究 | 第39-51页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·菌种 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·大肠杆菌湿菌体的获得 | 第39-40页 |
| ·菌体的直接固定化 | 第40页 |
| ·酶反应进程曲线的制作 | 第40页 |
| ·反应初速度和底物浓度关系的研究 | 第40页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第40页 |
| ·pH对酶活性的影响 | 第40页 |
| ·酶的热稳定性 | 第40页 |
| ·pH稳定性 | 第40-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-50页 |
| ·含amaA-pET28a(+)的E.coli工程菌的固定化 | 第41-45页 |
| ·氨基酰化酶的酶学性质研究 | 第45-49页 |
| ·固定化菌体细胞的操作稳定性和保存稳定性研究 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 结论与展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
