| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-27页 |
| ·细菌耐药性检测方法研究状况 | 第13-14页 |
| ·细菌耐药性常规检测方法 | 第13-14页 |
| ·细菌耐药性分子生物学检测方法 | 第14页 |
| ·多重PCR技术研究进展 | 第14-16页 |
| ·β-内酰胺类抗生素研究进展及抗菌机制 | 第16-18页 |
| ·β-内酰胺类抗生素研究进展 | 第16-18页 |
| ·β-内酰胺类抗生素的抗菌机制 | 第18页 |
| ·细菌对β-内酰胺类药物耐药状况及耐药机理研究 | 第18-23页 |
| ·细菌对β-内酰胺类药物耐药状况 | 第18-19页 |
| ·细菌对β内酰胺类抗生素耐药机理 | 第19-23页 |
| ·细菌对β-内酰胺类药物的耐药基因 | 第23页 |
| ·细菌对β-内酞胺类药物的耐药基因 | 第23-25页 |
| ·三重PCR扩增基因的选择 | 第25页 |
| ·本研究的前期工作基础 | 第25页 |
| ·本研究的目的意义 | 第25-26页 |
| ·技术路线 | 第26-27页 |
| 2 试验材料 | 第27-29页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·药品及试剂 | 第27-28页 |
| ·培养基分离培养基 | 第27页 |
| ·生化鉴定和药敏试验药物 | 第27-28页 |
| ·分子生物学试剂 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28-29页 |
| 3 方法 | 第29-36页 |
| ·试验菌株的分离鉴定与纯化 | 第29页 |
| ·KIRBY—BAUER法药物敏感性试验 | 第29页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·单基因PCR的筛选阳性对照基因 | 第30-31页 |
| ·DNA模板的制备 | 第30-31页 |
| ·单基因PCR扩增体系建立 | 第31页 |
| ·PCR产物检测 | 第31页 |
| ·耐药基因的测序 | 第31页 |
| ·三重PCR反应体系的初步建立 | 第31页 |
| ·三重PCR反应体系的优化 | 第31-33页 |
| ·Mg~(2+)浓度优化 | 第31-32页 |
| ·dNTPs浓度优化 | 第32页 |
| ·Taq酶浓度优化 | 第32页 |
| ·引物浓度优化 | 第32-33页 |
| ·退火温度优化 | 第33页 |
| ·循环次数优化 | 第33页 |
| ·PCR模板制备方法的选择 | 第33-34页 |
| ·三重PCR模板的优化 | 第34页 |
| ·增菌培养基配方的优化 | 第34页 |
| ·模板洗涤液的优化 | 第34页 |
| ·PCR模板制备步骤的优化 | 第34页 |
| ·三重PCR方法特异性试验 | 第34-35页 |
| ·三重PCR方法灵敏性试验 | 第35页 |
| ·三重PCR方法重复性试验 | 第35页 |
| ·批内重复性试验 | 第35页 |
| ·批间重复性试验 | 第35页 |
| ·三重PCR方法检测771株细菌对β-内酰胺类药物的耐药基因 | 第35页 |
| ·传统药敏试验方法与多重PCR检测方法检测方法及结果的比较 | 第35-36页 |
| 4 试验结果 | 第36-53页 |
| ·样品采集及细菌的分离纯化鉴定结果 | 第36页 |
| ·药敏试验结果 | 第36-37页 |
| ·引物设计结果 | 第37页 |
| ·单基因PCR的扩增结果 | 第37-38页 |
| ·阳性对照菌株PCR扩增产物测序结果及分析 | 第38-41页 |
| ·TEM基因及其序列分析 | 第38-39页 |
| ·SHV基因及其序列分析 | 第39-40页 |
| ·CTX-M基因及其序列分析 | 第40-41页 |
| ·三重PCR反应体系的初步建立结果 | 第41页 |
| ·三重PCR反应体系的优化结果 | 第41-45页 |
| ·Mg~(2+)浓度优化结果 | 第41-42页 |
| ·dNTPs浓度优化结果 | 第42页 |
| ·Taq酶浓度优化结果 | 第42-43页 |
| ·引物浓度优化结果 | 第43页 |
| ·退火温度优化结果 | 第43-44页 |
| ·循环次数优化结果 | 第44页 |
| ·三重PCR反应体系的最终优化结果 | 第44-45页 |
| ·PCR模板制备方法的选择 | 第45页 |
| ·PCR模板制备方法的优化结果 | 第45-46页 |
| ·增菌培养基配方的优化结果 | 第45页 |
| ·模板洗涤液的优化结果 | 第45页 |
| ·PCR模板制备步骤的优化结果 | 第45-46页 |
| ·特异性试验结果 | 第46页 |
| ·灵敏性试验结果 | 第46-47页 |
| ·重复性试验结果 | 第47-48页 |
| ·批内重复性 | 第47页 |
| ·批间重复性 | 第47-48页 |
| ·三重PCR方法检测771株细菌的结果 | 第48-51页 |
| ·传统药敏试验方法与三重PCR检测方法与结果的比较 | 第51-53页 |
| 5 分析与讨论 | 第53-59页 |
| ·扩增目的耐药基因的选择 | 第53页 |
| ·关于多重PCR反应目的片段选择及引物设计原则 | 第53页 |
| ·关于PCR反应模板制备方法的筛选与优化 | 第53-54页 |
| ·关于多重PCR反应方法建立和优化的影响因素 | 第54-56页 |
| ·Mg~(2+)用量的优化 | 第54-55页 |
| ·dNTPs用量的优化 | 第55页 |
| ·Taq酶用量的优化 | 第55页 |
| ·引物用量的优化 | 第55-56页 |
| ·PCR循环温度的优化 | 第56页 |
| ·影响PCR方法的其他因素 | 第56-57页 |
| ·耐药基因检出率与耐药表型的符合性 | 第57页 |
| ·关于分离菌中耐药基因检出率 | 第57-59页 |
| 6 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 攻读硕士期间发表的文章 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
