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陕西省PRRSV流行株的分离鉴定及其致病性的研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-13页
文献综述第13-29页
 第一章 猪繁殖与呼吸综合征及其病原的研究进展第13-29页
   ·猪繁殖与呼吸综合征病毒生物学特性第14-15页
     ·病毒的形态特征第14页
     ·病毒的侵入和释放第14页
     ·病毒的培养特性第14-15页
     ·病毒的抵抗力第15页
     ·病毒的血凝特性第15页
   ·猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究第15-18页
     ·病毒的基因组结构与特点第15-16页
     ·PRRSV 的分子遗传变异第16-18页
       ·ORF 1 的遗传变异第16-17页
       ·结构蛋白编码区的遗传变异第17-18页
   ·PRRSV 的流行病学研究第18-19页
   ·PRRS 的临床症状第19-21页
   ·诊断研究第21-23页
     ·病毒分离第21页
     ·抗原检测第21-22页
     ·血清学试验检测抗体第22页
       ·免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)第22页
       ·荧光抗体试验(IFA)第22页
       ·血清中和试验(SN)第22页
       ·酶联免疫吸附试验(ELISA)第22页
     ·分子生物学检测方法第22-23页
       ·原位杂交技术(ISH)第22-23页
       ·RT-PCR 技术第23页
   ·免疫学研究第23-27页
     ·感染免疫反应第23-24页
     ·对免疫细胞的影响第24页
     ·体液免疫第24-25页
     ·细胞免疫第25-26页
     ·细胞因子的产生第26页
     ·抗体依赖性增强作用第26-27页
   ·PRRSV 与其他病原体的相互作用第27页
   ·疫苗免疫第27-29页
试验研究第29-67页
 第二章 陕西省PRRSV 与CSFV、PCV2、PRV 混合感染的检测第29-35页
   ·实验材料第29-30页
     ·主要试验仪器第29-30页
     ·主要试剂和耗材第30页
   ·试验方法第30-32页
     ·病例与猪群的调查第30页
     ·病料的采集及处理第30页
     ·引物合成第30-31页
     ·PRRSV 和CSFV 的RT-PCR 检测第31页
     ·PCV2 和PRV 的PCR 检测第31-32页
   ·结果第32-34页
     ·猪病料中PRRSV、CSFV、PCV2 和PRV 的检测结果第32-34页
   ·讨论第34页
   ·小结第34-35页
 第三章 陕西省PRRSV 流行毒株的分离与初步鉴定第35-43页
   ·实验材料第35-36页
     ·主要试验仪器第35页
     ·主要试剂第35-36页
     ·细胞与单克隆抗体第36页
   ·试验方法第36-38页
     ·培养基的配制第36页
     ·细胞培养用试剂的配制第36-37页
     ·引物设计第37页
     ·细胞培养第37页
     ·病毒分离第37页
     ·间接免疫荧光检测第37-38页
   ·结果第38-40页
   ·讨论第40-41页
   ·小结第41-43页
 第四章 陕西省PRRSV 流行毒株主要基因片段的序列分析第43-60页
   ·实验材料第43-45页
     ·毒株第43页
     ·菌株、质粒第43页
     ·主要仪器第43-44页
     ·主要试剂及培养基的配制第44页
     ·PRRSV 分离株核苷酸序列第44-45页
     ·分子生物学分析软件第45页
   ·实验方法第45-49页
     ·PRRSV 病毒的增殖第45页
     ·引物设计第45-46页
     ·PRRSV 感染的MARC-145 细胞中病毒总RNA 的提取第46页
     ·各段基因的扩增第46-47页
     ·RT-PCR 产物的鉴定第47页
     ·PCR 产物的纯化回收cDNA 片段第47页
     ·纯化产物与pMD-18T Vector 连接第47页
     ·感受态细胞的制备(CaCl_2 法)第47-48页
     ·连接产物的转化第48页
     ·重组质粒的提取第48-49页
     ·重组质粒的PCR 鉴定第49页
     ·重组质粒的酶切鉴定第49页
     ·重组质粒的测序分析第49页
     ·本研究分离毒株基因序列变异分析第49页
   ·实验结果第49-57页
     ·PRRSV 各个基因片段的RT-PCR 扩增结果第49-50页
     ·重组质粒的PCR 鉴定结果第50页
     ·重组质粒的酶切鉴定结果第50页
     ·各个基因片段的测序与序列拼接第50-51页
     ·NSP2 的氨基酸序列分析第51-52页
     ·各结构蛋白核苷酸序列及其推导氨基酸序列相似性比较第52-54页
     ·系统进化分析第54-57页
   ·讨论第57-59页
     ·关于PRRSV 的变异第57-58页
     ·NSP2 区段的变异第58页
     ·结构蛋白编码区的变异第58页
     ·PRRSV 的系统进化分析第58-59页
   ·小结第59-60页
 第五章 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的致病性研究第60-67页
   ·试验材料第60页
     ·毒株第60页
     ·试剂第60页
     ·试验动物第60页
   ·试验方法第60-62页
     ·病毒增殖第60页
     ·病毒TCID50 的测定第60页
     ·致病性试验第60-62页
       ·血清中PRRSV 抗体的检测第61页
       ·中和试验第61-62页
   ·结果第62-65页
     ·病毒的增殖第62页
     ·TCID50 测定第62页
     ·致病性试验第62-65页
       ·体温变化第62-63页
       ·临床症状第63页
       ·抗原和抗体检测结果第63-65页
   ·讨论第65-66页
   ·小结第66-67页
结论第67-68页
参考文献第68-75页
英文缩略词及中英文对照第75-76页
致谢第76-77页
作者简介第77页

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