| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-24页 |
| 1 水稻瘤矮病毒的研究进展 | 第14-19页 |
| ·水稻瘤矮病的发生与流行 | 第14页 |
| ·水稻瘤矮病的病害症状 | 第14页 |
| ·水稻瘤矮病的传毒介体 | 第14页 |
| ·水稻瘤矮病毒分子生物学研究进展 | 第14-19页 |
| ·病毒粒体结构与特性 | 第14-15页 |
| ·病毒的基因组结构和编码特性 | 第15页 |
| ·病毒编码的蛋白及其同源蛋白 | 第15-18页 |
| ·RGDV 与水稻互作的研究 | 第18-19页 |
| 2 酵母双杂交系统原理及其用途 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交系统的主要用途 | 第20页 |
| 3 双分子荧光互补技术 | 第20-22页 |
| ·BiFC 的技术原理 | 第21-22页 |
| ·荧光蛋白的特性 | 第21页 |
| ·BiFC 技术的基本原理 | 第21-22页 |
| ·BiFC 的应用 | 第22页 |
| 4. 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-40页 |
| 1.P2、P3、P7、P8、Pn9、Pn10、Pn11、Pn12 的酵母表达载体的构建及自激活 效应检测 | 第24-30页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·试验材料 | 第24页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-30页 |
| ·S2、S3、S7、S8、S9、S10、S11、S12 基因的RT-PCR 扩增 | 第24-25页 |
| ·S2、S3、S7、S8、S9、S10、S11、S12基因cDNA 第一条链的合成 | 第24页 |
| ·S2、S3、S7、S8、S9、S10、S11、S12基因PCR 扩增 | 第24-25页 |
| ·S2、S3、S7、S8、S9、S10、S11、S12基因片段的检测与回收 | 第25-26页 |
| ·S2、S3、S7、S8、S9、S10、S11、S12基因PCR 的回收产物与pMD18-T 载体的连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第26-27页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第27-28页 |
| ·S2、S3、S7、S8、S9、S10、S11、S12基因酵母表达载体的构建 | 第28页 |
| ·质粒的保存 | 第28页 |
| ·菌株的验证 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的自激活活性检测 | 第29-30页 |
| ·AH109 感受态细胞制备（参考鹿连明的博士学位论文的方法） | 第29页 |
| ·重组酵母表达载体转化酵母菌感受态细胞（参考鹿连明的博士学位论文的方法） | 第29页 |
| ·通过不同的营养缺陷型培养基进行检测 | 第29页 |
| ·通过菌落显色试验的检测：α-半乳糖苷酶活性分析 | 第29-30页 |
| 2 利用酵母双杂交系统研究RGDV P3 蛋白的自身互作 | 第30-31页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-31页 |
| ·重组质粒共转化AH109 | 第30-31页 |
| ·蛋白自身互作的检测 | 第31页 |
| 3 利用酵母双杂交系统筛选水稻 cDNA 文库 | 第31-34页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·PCR 引物 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·文库质粒和诱饵质粒共转化AH109 感受态细胞 | 第32页 |
| ·阳性克隆菌落筛选 | 第32页 |
| ·培养基的选择 | 第32页 |
| ·转化产物的培养与菌落筛选 | 第32页 |
| ·阳性酵母质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·PCR 鉴定阳性克隆中的插入片段的文库质粒cDNA | 第33-34页 |
| ·酵母质粒转化大肠杆菌DH5α及PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·阳性克隆测序和分析 | 第34页 |
| 4 酵母双杂交验证P2 和PC1、P2 和PC3 蛋白互作 | 第34-36页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试验材料 | 第34页 |
| ·菌株和质粒 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·水稻叶片总RNA 的提取（Trizol 法） | 第35页 |
| ·PC1 与PC3 基因全长 ORF 的 RT-PCR 扩增 | 第35页 |
| ·PC1 与PC3 基因的cDNA 第一条链的合成 | 第35页 |
| ·PC1 与PC3 基因PCR 扩增（方法同本章1.2.1.2） | 第35页 |
| ·PC1 与PC3 基因片段的检测与回收（方法同本章1.2.2） | 第35页 |
| ·PC1 与PC3 基因PCR 回收产物和T 载体的连接（方法同本章1.2.3） | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备和转化（方法同本章1.2.4） | 第35页 |
| ·重组质粒的鉴定（方法同本章1.2.5） | 第35页 |
| ·PC1 与PC3 基因酵母双杂交载体的构建（方法同本章1.2.6） | 第35页 |
| ·PC1 与PC3 酵母表达载体的自激活效应检测（方法同本章1.2.9） | 第35页 |
| ·酵母双杂交检测 P2 和PC1、P2 和PC3 蛋白两两互作情况 | 第35-36页 |
| 5 利用双分子荧光互补技术进一步验证RGDV P3 蛋白自身互作、P2 和PC1、P2 和PC3蛋白互作 | 第36-40页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·菌株、质粒与植物材料 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-40页 |
| ·S2、S3、PC1 与PC3 基因的PCR 扩增和检测回收 | 第36-37页 |
| ·S2、S3、PC1 与PC3 基因的克隆和鉴定 | 第37页 |
| ·双分子荧光互补表达载体的构建 | 第37页 |
| ·双分子荧光的互补表达载体转化农杆菌GV1301 | 第37-38页 |
| ·农杆菌GV1301 感受态细胞制备 | 第37-38页 |
| ·双分子荧光互补表达载体转化农杆菌GV1301（电击转化法） | 第38页 |
| ·双分子荧光互补表达载体在烟草叶片中的表达 | 第38-39页 |
| ·农杆菌培养（参考兰汉红硕士学位论文的方法） | 第38页 |
| ·渗透注射农杆菌悬液的制备 | 第38页 |
| ·含重组双分子荧光互补表达载体的农杆菌渗透注射本氏烟叶片 | 第38-39页 |
| ·激光共聚焦观察 | 第39-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-52页 |
| 1.P2、P3、P7、P8、Pn9、Pn10、Pn11、Pn12 的酵母双杂交载体的构建及自激 活效应检测 | 第40-42页 |
| ·酵母双表达载体的鉴定 | 第40页 |
| ·各基因组片段在酵母中自激活活性的检测 | 第40-41页 |
| ·α-半乳糖苷酶活性分析 | 第41-42页 |
| 2 利用酵母双杂交系统研究RGDV P3 蛋白的自身互作 | 第42页 |
| 3 利用酵母双杂交系统筛选水稻 cDNA 文库 | 第42-45页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第42-43页 |
| ·PCR 鉴定文库质粒cDNA 插入片段 | 第43-45页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第45页 |
| 4 酵母双杂交验证P2 和PC1、P2 和PC3 蛋白互作 | 第45-48页 |
| ·PC1、PC3 基因全长 ORF 的RT-PCR 扩增 | 第45页 |
| ·PC1、PC3 基因重组克隆载体的PCR 和酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·PC1、PC3 基因酵母表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·PC1 与PC3 酵母表达载体的自激活效应检测 | 第47页 |
| ·P2 和PC1、P2 和PC3 蛋白在酵母中的互作情况检测 | 第47-48页 |
| 5 利用双分子荧光互补技术进一步验证RGDV P3 蛋白自身互作、P2 和PC1、P2 和PC3蛋白互作 | 第48-52页 |
| ·S2、S3、PC1 与PC3 基因的PCR 扩增 | 第48-49页 |
| ·S2、S3、PC1 与PC3 基因的克隆 | 第49页 |
| ·双分子荧光互补表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·蛋白互作情况的检测 | 第50-52页 |
| 第四章 问题与讨论 | 第52-57页 |
| 1 P2、P3、P7、P8、Pn9、Pn10、Pn11、Pn12 酵母双杂交载体的构建及其自激 活效应的检测 | 第52-53页 |
| 2 利用酵母双杂交系统筛选水稻 cDNA 文库 | 第53-54页 |
| 3 酵母双杂交及双分子荧光互补验证蛋白互作 | 第54-57页 |
| ·酵母双杂交及双分子荧光互补验证RGDV P3 蛋白自身互作 | 第54-55页 |
| ·酵母双杂交及双分子荧光互补验证P2 和PC1、P2 和PC3 蛋白互作 | 第55-57页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 攻硕期间发表及（拟）投稿的文章 | 第67-68页 |
| 附录一 本研究所用引物序列 | 第68-70页 |
| 1. P2、P3、P7、P8、Pn9、Pn10、Pn11、Pn12 的酵母双杂交载体的构建及自激 活效应检测 | 第68-69页 |
| 2. 酵母双杂交验证P2 和PC1、P2 和PC3 蛋白互作实验引物 | 第69页 |
| 3. 利用双分子荧光互补技术进一步验证RGDV P3 蛋白自身互作、P2 和PC1、P2 和PC3蛋白互作 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
