| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 符号及缩略语 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 离子平衡调节基因及其在植物耐盐基因工程中的作用 | 第11-21页 |
| 1 耐盐性相关的离子平衡调节基因与植物耐盐性的关系 | 第11-15页 |
| ·植物Na~+/H~+逆向转运蛋白 | 第11-12页 |
| ·质膜Na~+/H~+反向转运蛋白基因(Salt Overly Sensitive,SOS1) | 第12页 |
| ·液泡膜Na~+/H~+反向转运蛋白基因(Na~+/H~+antiporter,NHX1) | 第12页 |
| ·植物H~+-ATPase基因(PMA4)、H~+-PPiase基因(AVP1) | 第12-13页 |
| ·植物K~+、Na~+转运蛋白 | 第13页 |
| ·低亲和性K~+转运蛋白 | 第13页 |
| ·高亲和性K~+转运蛋白 | 第13页 |
| ·植物Cl~-通道(chloride channels,CLCs)蛋白 | 第13-15页 |
| ·质膜Cl~-通道 | 第14页 |
| ·液泡膜Cl~-通道 | 第14页 |
| ·其他Cl~-通道 | 第14-15页 |
| 2 离子平衡调节基因在植物耐盐基因工程中的研究进展 | 第15-20页 |
| ·NHX基因 | 第15-17页 |
| ·SOSl基因 | 第17-18页 |
| ·PMA4基因和AVP1基因 | 第18页 |
| ·OsKAT1基因 | 第18-19页 |
| ·CLCs基因 | 第19-20页 |
| 3 结语 | 第20-21页 |
| 第二章 研究报告 栽培大豆和滩涂野大豆及其杂交后代CLC1基因鉴定和功能的初步研究 | 第21-51页 |
| 1. 试验材料与方法 | 第22-35页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·植物材料与培养 | 第22-23页 |
| ·菌株和质粒 | 第23页 |
| ·主要缓冲液、试剂及抗生素 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·PCR引物 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-35页 |
| ·植株叶片和根部总RNA的提取 | 第25页 |
| ·RNA定量和完整性检测 | 第25页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增cDNA全长 | 第26-27页 |
| ·PCR产物电泳检测 | 第27页 |
| ·PCR产物的回收与连接 | 第27-28页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌感受态细胞(JM109) | 第28页 |
| ·目的片段的转化及阳性克隆的鉴定 | 第28-29页 |
| ·质粒DNA的抽提 | 第29-30页 |
| ·酶切 | 第30页 |
| ·T4连接及转化 | 第30-31页 |
| ·验证阳性克隆 | 第31页 |
| ·PS1aGFP-8-CLC1瞬时表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·pET30a(+)-CLC1原核表达载体的构建 | 第32页 |
| ·洋葱表皮细胞培养 | 第32页 |
| ·金粉包裹PS1aGFP-8-CLC1质粒 | 第32-33页 |
| ·基因枪轰击转化 | 第33-34页 |
| ·pET30a(+)-CLC1融合蛋白的诱导表达 | 第34页 |
| ·生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 2. 结果与分析 | 第35-46页 |
| ·RNA定量和完整性分析 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR检测 | 第36-37页 |
| ·半定量RT-PCR分析 | 第37-38页 |
| ·全长序列测序结果分析 | 第38-41页 |
| ·CLC1蛋白序列的跨膜区域预测 | 第41-42页 |
| ·CLC1的亚细胞定位 | 第42-44页 |
| ·CLC1基因的原核表达 | 第44-46页 |
| 3. 讨论 | 第46-51页 |
| ·大豆总RNA提取的技术分析 | 第46-47页 |
| ·大豆CLC1基因在不同品种中的序列比对分析 | 第47页 |
| ·盐胁迫下不同大豆材料CLC1基因丰度变化分析 | 第47-49页 |
| ·大豆CLC1蛋白的亚细胞定位和CLC1基因原核表达 | 第49-51页 |
| 全文结论 | 第51-53页 |
| 创新性 | 第53-55页 |
| 存在问题与展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第65-67页 |
| 附录 | 第67-75页 |
| 附录Ⅰ:pEASY-Blunt Cloning Vector质粒的图谱(Trans) | 第67-68页 |
| 附录Ⅱ:PS1aGFP-8瞬时表达载体结构图 | 第68-69页 |
| 附录Ⅲ:大肠杆菌表达载体pET-30a(+)的图谱 | 第69-70页 |
| 附录Ⅳ:试剂配方 | 第70-73页 |
| 附录Ⅴ:培养基配方 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
