| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| ·骨钙素分子的研究现状 | 第10-11页 |
| ·骨钙素的分子结构及基因表达 | 第11-13页 |
| ·骨钙素的分子结构 | 第11-12页 |
| ·OC 基因的转录调控及机制 | 第12-13页 |
| ·骨钙素的表达 | 第13-15页 |
| ·骨钙素在骨骼中的表达 | 第13-14页 |
| ·骨钙素在软骨中的表达 | 第14-15页 |
| ·血液中的骨钙素 | 第15页 |
| ·骨钙素在其它组织的表达 | 第15页 |
| ·骨钙素的调节功能 | 第15-17页 |
| ·Osteocalcin 对血糖稳态的调控 | 第15-16页 |
| ·OST-PTP 对Osteocalcin 生物活性功能的调节 | 第16页 |
| ·Osteocalcin 在野生型小鼠中对糖代谢的调节功能 | 第16-17页 |
| ·影响BGP 的因素 | 第17-19页 |
| ·磷,钙及其比例 | 第17-18页 |
| ·维生素A | 第18页 |
| ·维生素K | 第18页 |
| ·维生素D | 第18-19页 |
| ·激素对BGP 基因表达的调节作用 | 第19页 |
| ·骨钙素有待深入研究的问题 | 第19-20页 |
| 第二章 骨钙素基因克隆及真核载体构建 | 第20-31页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·实验试剂 | 第20-21页 |
| ·实验用具及仪器 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-26页 |
| ·PCR 扩增骨钙素目的片段 | 第22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR 扩增产物(骨钙素) | 第22-23页 |
| ·构建pcDNA3.1-HA 骨钙素表达载体 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第24-25页 |
| ·质粒的小量提取﹑纯化与检测 | 第25-26页 |
| ·结果 | 第26-30页 |
| ·质粒载体进行酶切 | 第26页 |
| ·外源基因BGP 和质粒载体的回收 | 第26-27页 |
| ·重组载体的构建 | 第27-28页 |
| ·重组克隆的筛选 | 第28-29页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第29页 |
| ·重组克隆序列的测定 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 PCDNA3.1(+)-HA-HIS-BGP 真核表达载体构建 | 第31-42页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·PCR 扩增BGP 目的片段 | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR 扩增产物(BGP) | 第32页 |
| ·构建pcDNA3.1(+)-HA-His-BGP 表达载体 | 第32-34页 |
| ·pcDNA3.1(+)-HA-His-BGP 表达载体的转化及提取 | 第34-35页 |
| ·pcDNA3.1(+)-HA-His-BGP 表达载体的检测 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-40页 |
| ·PCR 扩增BGP 目的片段 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增BGP 目的片段双酶切回收 | 第36-37页 |
| ·质粒载体的琼脂糖检测 | 第37页 |
| ·质粒载体双酶切的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第37-38页 |
| ·酶连及重组克隆的筛选 | 第38页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组克隆序列的测定 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 原核表达载体PGEX-4T-1-BGP 的构建 | 第42-51页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·PCR 扩增骨钙素目的片段 | 第42-43页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR 扩增产物(骨钙素) | 第43页 |
| ·构建pGEX-4T-1 骨钙素表达载体 | 第43-44页 |
| ·感受态细胞转化 | 第44页 |
| ·质粒的小量提取﹑纯化与检测 | 第44-45页 |
| ·结果 | 第45-49页 |
| ·pGEX-4T-1 质粒提取与BGP 目的基因PCR 扩增 | 第45页 |
| ·目的基因PCR 扩增后纯化回收 | 第45-46页 |
| ·新提取质粒载体和目的基因BGP 双酶切 | 第46页 |
| ·外源基因和质粒载体胶回收 | 第46-47页 |
| ·重组载体的构建 | 第47页 |
| ·重组克隆的筛选 | 第47-48页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第48页 |
| ·重组克隆序列的测定 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 附录 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
