| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-22页 |
| ·甘露糖异构酶简介 | 第12页 |
| ·甘露糖异构酶的研究应用 | 第12-16页 |
| ·在甘露糖生产中的应用 | 第12-13页 |
| ·在甘露醇生产中的应用 | 第13-15页 |
| ·国内外研究现状 | 第15-16页 |
| ·大肠杆菌表达体系 | 第16-17页 |
| ·大肠杆菌表达载体 | 第16页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中的表达部位 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第17-19页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第18-19页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中表达 | 第19页 |
| ·包涵体蛋白复性策略 | 第19-20页 |
| ·包涵体的形成机制 | 第19页 |
| ·包涵体复性的基本原则 | 第19-20页 |
| ·包涵体复性的策略 | 第20页 |
| ·课题研究的意义与主要研究内容 | 第20-22页 |
| ·研究意义 | 第20-21页 |
| ·研究内容 | 第21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 第2章 甘露糖异构酶基因克隆及原核表达 | 第22-46页 |
| ·材料和仪器 | 第22-23页 |
| ·菌株及载体 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| ·E.coli 基因组DNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·PCR 引物设计与目的基因的获得 | 第24页 |
| ·DNA 的纯化回收 | 第24-25页 |
| ·克隆载体pT-mi 的构建及测序 | 第25-26页 |
| ·pET-mi 原核表达载体的构建 | 第26-28页 |
| ·重组甘露糖异构酶基因在E.coli 中的诱导表达 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第28-29页 |
| ·粗酶液制备 | 第29页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第29-30页 |
| ·MI 酶活测定 | 第30-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-45页 |
| ·mi 基因克隆 | 第31-32页 |
| ·克隆载体pT-mi 的构建与鉴定 | 第32-35页 |
| ·原核表达载体pET-mi 的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第36页 |
| ·粗酶液活性测定 | 第36-39页 |
| ·诱导培养条件的优化 | 第39-43页 |
| ·MI 酶性质参数的测定 | 第43-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第3章 甘露糖异构酶在毕赤酵母中表达体系的建立 | 第46-58页 |
| ·材料与仪器 | 第46-47页 |
| ·菌株及载体 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46-47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·mi 的基因克隆 | 第47页 |
| ·毕赤酵母穿梭载体pGAPZ-mi 的构建 | 第47-48页 |
| ·毕赤酵母氯化锂转化 | 第48-50页 |
| ·SDS 法提取毕赤酵母基因组 | 第50页 |
| ·重组酵母的初步鉴定 | 第50页 |
| ·pGAPZ-mi 毕赤酵母重组子的诱导表达及参数测定 | 第50-51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-56页 |
| ·mi 基因克隆结果 | 第51-52页 |
| ·重组载体pGAPZ-mi 的鉴定 | 第52-54页 |
| ·重组穿梭载体酵母转化结果 | 第54页 |
| ·重组毕赤酵母的PCR 鉴定 | 第54页 |
| ·MI 蛋白在毕赤酵母中的SDS-PAGE 鉴定 | 第54-55页 |
| ·MI 蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 第4章 甘露糖异构酶包涵体的复性 | 第58-65页 |
| ·材料与仪器 | 第58页 |
| ·菌株及试剂 | 第58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·MI 包涵体的制备 | 第58页 |
| ·MI 包涵体的提取与洗涤 | 第58-59页 |
| ·MI 包涵体的复性与纯化回收 | 第59页 |
| ·复性产物生物活性的测定 | 第59-60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-64页 |
| ·MI 包涵体的提取和洗涤 | 第60页 |
| ·MI 包涵体的溶解 | 第60-61页 |
| ·蛋白复性条件的优化 | 第61-63页 |
| ·MI 包涵体的复性和纯化回收 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |