| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-27页 |
| 1 植物细胞凋亡的研究进展 | 第11-12页 |
| ·细胞凋亡的主要特征 | 第11-12页 |
| ·细胞凋亡途径 | 第12页 |
| 2 植物衰老的研究进展 | 第12-16页 |
| ·衰老过程的生理变化 | 第13-15页 |
| ·植物衰老的影响因素 | 第15-16页 |
| 3 植物细胞凋亡,细胞程序化死亡,衰老三者的关系 | 第16-17页 |
| 4 基因克隆技术的研究进展 | 第17-21页 |
| ·基因芯片技术分离目的基因 | 第17-18页 |
| ·基因文库技术分离目的基因 | 第18页 |
| ·功能蛋白组分离目的基因 | 第18页 |
| ·PCR技术在基因克隆中的应用 | 第18-19页 |
| ·mRNA差别显示技术分离差别表达基因 | 第19页 |
| ·从研究缺失突变体的表型着手分离基因 | 第19-20页 |
| ·图位克隆目的基因 | 第20页 |
| ·酵母双杂交系统分离克隆基因 | 第20-21页 |
| ·生物信息学在分离克隆基因中的应用 | 第21页 |
| ·基因分离克隆的新技术 | 第21页 |
| 5 生物信息学的应用与基因功能的预测 | 第21-23页 |
| ·生物信息学的主要研究内容 | 第22-23页 |
| 6 大肠杆菌表达系统的研究进展 | 第23-24页 |
| 7 荧光定量PCR技术的研究进展 | 第24-25页 |
| ·目标基因检测或诊断 | 第24页 |
| ·基因剂量或拷贝数检测 | 第24页 |
| ·基因突变分析及多态性研究 | 第24-25页 |
| 8 抗细胞凋亡DAD1的研究进展 | 第25页 |
| 9 本研究的目的意义 | 第25-27页 |
| 第二章 陆地棉细胞凋亡基因GhDAD1的克隆及序列分析 | 第27-44页 |
| 1 实验材料 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌株与质粒 | 第27-28页 |
| ·酶、生化试剂与试剂盒 | 第28页 |
| 2 实验方法 | 第28-35页 |
| ·从中棉所36号cDNA均一化文库中筛选含有GhDAD1的EST | 第28页 |
| ·总RNA的提取及反转录 | 第28-30页 |
| ·棉花基因组DNA的提取与纯化 | 第30-31页 |
| ·目的基因的分离 | 第31-34页 |
| ·序列分析 | 第34-35页 |
| 3 实验结果与分析 | 第35-42页 |
| ·有效EST序列及GhDAD1基因的EST获得 | 第35页 |
| ·RNA提取以及cDNA第一链 | 第35-36页 |
| ·陆地棉抗细胞凋亡基因GhDAD1基因5’端侧翼序列的获得 | 第36页 |
| ·陆地棉GhDAD1基因全长cDNA的获得 | 第36-38页 |
| ·陆地棉GhDAD1基因的生物信息学分析 | 第38-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| ·染色体步移克隆新基因中存在的问题及其进展 | 第42页 |
| ·GhDAD1基因的克隆和分析 | 第42-44页 |
| 第三章 GhDAD1在陆地棉组织中的定位及表达分析 | 第44-55页 |
| 1 材料与方法 | 第44-47页 |
| ·供试材料 | 第44页 |
| ·材料处理 | 第44-46页 |
| ·试剂的配制 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| 2 实验结果与分析 | 第47-51页 |
| ·GhDAD1表达谱的分析 | 第47-48页 |
| ·外源激素对棉花GhDAD1表达的影响 | 第48-49页 |
| ·化学分子对棉花GhDAD1表达的影响 | 第49-50页 |
| ·荧光原位杂交分析 | 第50-51页 |
| 3 本章讨论 | 第51-55页 |
| ·荧光定量PCR的优点与存在的问题 | 第51-53页 |
| ·GhDAD1基因的表达模式分析 | 第53-55页 |
| 第四章 GhDAD1原核表达分析及正反义表达载体的构建 | 第55-64页 |
| 1 实验材料与方法 | 第55-60页 |
| ·菌株与质粒 | 第55页 |
| ·酶、生化试剂及试剂盒 | 第55-56页 |
| ·试剂的配制 | 第56-58页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第59页 |
| ·转基因正反义表达载体PBI121-GhDAD1的构建 | 第59-60页 |
| 2 实验结果 | 第60-62页 |
| ·GhDAD1原核表达结果 | 第60-61页 |
| ·转基因植物正反义表达载体PBI121-GhDAD1s和PBI121-GhDAD1 antis的构建及鉴定 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| ·pET表达系统的优化 | 第62页 |
| ·构建正反义表达载体的 | 第62-64页 |
| 第五章 结论及研究展望 | 第64-66页 |
| 1 全文结论 | 第64-65页 |
| 2 研究展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
