| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词 | 第13-14页 |
| 1. 文献综述 | 第14-18页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌概述 | 第14-15页 |
| ·病原学 | 第14页 |
| ·流行病学 | 第14页 |
| ·PCP致病机理 | 第14-15页 |
| ·APP毒力因子研究进展 | 第15页 |
| ·细菌双组分调控系统研究概述 | 第15-18页 |
| ·组分调控系统概述 | 第16页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌双组分调控系统研究现状 | 第16-18页 |
| 2. 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 3. 材料与方法 | 第19-35页 |
| ·材料 | 第19-25页 |
| ·方法 | 第25-35页 |
| ·生物信息学相关分析 | 第25页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的复苏 | 第25页 |
| ·DNA的抽提 | 第25页 |
| ·DNA的回收与纯化 | 第25-26页 |
| ·RNA的抽提 | 第26页 |
| ·DnaseI消化RNA中残余的DNA | 第26-27页 |
| ·RNA反转录 | 第27页 |
| ·质粒的转化 | 第27-28页 |
| ·质粒的抽提 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第28页 |
| ·SLW01菌株narP及narQ DNA上下游片段的扩增与鉴定 | 第28-30页 |
| ·pEMAnarP,pEMΔnarQ的构建及鉴定 | 第30页 |
| ·ΔnarP、ΔnarQ、ΔnarPQ的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| ·ΔnarQ/ΔnarP互补菌株(CnarP,CnarQ)的构建及鉴定 | 第31-32页 |
| ·缺失菌株生物学特性分析 | 第32-33页 |
| ·反应调控蛋白RR(narP)的表达 | 第33页 |
| ·基因芯片定制及芯片结果分析相关操作 | 第33-35页 |
| 4. 结果与分析 | 第35-54页 |
| ·JL03中narQ/narP生物信息学相关分析 | 第35-38页 |
| ·narQ/narP一般特性 | 第35页 |
| ·narQ/narP进化树绘制 | 第35-37页 |
| ·narQ/narP保守性区域分析 | 第37-38页 |
| ·重组转移质粒pEMΔnarP,pEMΔnarQ的构建和缺失菌株筛选与鉴定 | 第38-41页 |
| ·ΔnarQ/ΔnarP互补菌株CnarP,CnarQ的构建和鉴定 | 第41-42页 |
| ·突变株生物学特性分析 | 第42-46页 |
| ·生长速率分析 | 第42-43页 |
| ·溶血活性分析 | 第43-44页 |
| ·遗传稳定性分析 | 第44页 |
| ·突变株外观形态方面的观察 | 第44-45页 |
| ·SLW01、ΔnarP、CnarP的LD_(50)的测定 | 第45-46页 |
| ·反应调控蛋narP的克隆、表达 | 第46页 |
| ·基因芯片定制和结果分析 | 第46-54页 |
| ·RNA质量控制 | 第46页 |
| ·差异表达基因的筛选 | 第46页 |
| ·差异表达基因的荧光定量验证 | 第46-48页 |
| ·差异表达基因功能分析与聚类 | 第48-54页 |
| 5. 讨论 | 第54-61页 |
| ·APP组分调控系统narQ/narP的选择 | 第54页 |
| ·突变株构建与筛选 | 第54-55页 |
| ·基因芯片RNA提取时机的选择 | 第55页 |
| ·有氧条件下缺失株与亲本株(SLW01)基因差异表达变化 | 第55-56页 |
| ·厌氧条件下APP缺失株与亲本菌(SLW01)差异表达基因分析 | 第56-57页 |
| ·亲本菌(SLW01)厌氧培养条件下差异表达基因变化 | 第57-59页 |
| ·转录水平上调的基因 | 第57-58页 |
| ·转录水平下调的基因 | 第58-59页 |
| ·综合讨论 | 第59页 |
| ·展望 | 第59-61页 |
| 6. 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附表 | 第68-84页 |
