| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstracts | 第6-9页 |
| 常用缩略词 | 第9-11页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-39页 |
| ·前言 | 第14-15页 |
| ·鱼类抗菌肽的研究 | 第15-25页 |
| ·鱼类抗菌肽的生化特点与组成 | 第15-17页 |
| ·鱼类抗菌肽的生物学活性与功能 | 第17-18页 |
| ·鱼类抗菌肽的抗菌机制 | 第18-23页 |
| ·鱼类抗菌肽表达调控 | 第23-25页 |
| ·抗菌肽hepcidin的研究 | 第25-28页 |
| ·Hepcidin的结构 | 第26-27页 |
| ·Hepcidin的表达分布 | 第27页 |
| ·Hepcidin与机体铁代谢 | 第27-28页 |
| ·Hepcidin与炎症和贫血 | 第28页 |
| ·抗菌肽基因工程 | 第28-31页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第29-31页 |
| ·酵母表达系统 | 第31页 |
| ·抗菌肽在水产养殖上的应用前景 | 第31-32页 |
| ·cDNA文库与EST分析 | 第32-36页 |
| ·cDNA文库构建技术 | 第32-35页 |
| ·EST分析技术 | 第35-36页 |
| ·本课题研究的目的与意义 | 第36-37页 |
| ·本文技术路线 | 第37-39页 |
| 第二章 黄鳝肠道cDNA文库的构建与分析 | 第39-55页 |
| ·试验材料 | 第39-42页 |
| ·组织样品 | 第39页 |
| ·质粒和菌株 | 第39页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第39-40页 |
| ·RNA提取试剂 | 第40页 |
| ·缓冲液 | 第40-42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·提取RNA的实验用品 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-50页 |
| ·黄鳝肠道组织样品的处理 | 第42-43页 |
| ·总RNA提取 | 第43页 |
| ·RNA甲醛变性凝胶电泳 | 第43页 |
| ·mRNA的分离 | 第43-44页 |
| ·cDNA文库构建 | 第44-46页 |
| ·cDNA与重组接头连接 | 第46页 |
| ·利用色谱柱分级分离cDNA及收集 | 第46-47页 |
| ·BP重组反应 | 第47页 |
| ·电转化至大肠杆菌DH10B | 第47-49页 |
| ·cDNA文库质量鉴定 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-53页 |
| ·黄鳝肠道总RNA的提取 | 第50页 |
| ·mRNA分离 | 第50页 |
| ·cDNA文库构建与鉴定 | 第50-52页 |
| ·重组率和插入片段PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 黄鳝肠道EST分析 | 第55-81页 |
| ·试验材料 | 第55页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·试剂及仪器 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·文库阳性克隆菌液培养及鉴定 | 第55-56页 |
| ·单向序列测定 | 第56页 |
| ·信息收集与处理 | 第56-57页 |
| ·结果与分析 | 第57-78页 |
| ·黄鳝肠道ESTs初步分析 | 第57-61页 |
| ·ESTs功能注释 | 第61页 |
| ·GO分类 | 第61-63页 |
| ·营养代谢相关的EST | 第63-68页 |
| ·免疫与抗病相关功能基因鉴定 | 第68-77页 |
| ·与不同食性鱼类肠道cDNA文库的比较 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-81页 |
| ·EST序列代表性 | 第78页 |
| ·EST序列长度 | 第78页 |
| ·EST序列比对与拼接 | 第78-79页 |
| ·基因注释及功能分类 | 第79-80页 |
| ·黄鳝肠道基因整体表达情况 | 第80-81页 |
| 第四章 黄鳝hepcidin序列获得与分析 | 第81-93页 |
| ·材料 | 第81页 |
| ·网络资源及应用软件 | 第81-82页 |
| ·方法 | 第82-85页 |
| ·cDNA文库混合质粒的制备 | 第82-83页 |
| ·PCR反应 | 第83页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第83页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第83-84页 |
| ·连接反应 | 第84页 |
| ·转化至感受态大肠杆菌DH5α | 第84页 |
| ·测序鉴定 | 第84-85页 |
| ·序列分析 | 第85页 |
| ·结果与分析 | 第85-91页 |
| ·PCR及序列测定 | 第85-86页 |
| ·编码的氨基酸序列 | 第86页 |
| ·基本性质分析 | 第86-87页 |
| ·三级结构预测 | 第87-88页 |
| ·同源性分析 | 第88-91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| 第五章 黄鳝hepcidin原核表达研究 | 第93-124页 |
| ·pet22b(+)-hepcidin重组表达载体构建与原核表达 | 第94-102页 |
| ·材料 | 第94页 |
| ·方法 | 第94-99页 |
| ·结果与分析 | 第99-102页 |
| ·pET43.1a(+)-hepcidin重组表达载体构建与原核表达 | 第102-108页 |
| ·材料 | 第102页 |
| ·方法 | 第102页 |
| ·结果与分析 | 第102-108页 |
| ·pET32a(+)与hepcidin基因重组载体构建与原核表达 | 第108-120页 |
| ·材料 | 第108页 |
| ·方法 | 第108页 |
| ·结果与分析 | 第108-120页 |
| ·讨论 | 第120-124页 |
| ·关于原核表达载体 | 第120-121页 |
| ·关于表达菌 | 第121页 |
| ·含信号肽序列的hepcidin重组表达载体在原核细胞中不表达原因分析 | 第121页 |
| ·BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL中高效表达原因分析 | 第121-122页 |
| ·关于pET32a(a)-nhepcidin表达条件优化 | 第122-124页 |
| 第六章 总结与展望 | 第124-126页 |
| ·结论 | 第124-125页 |
| ·本研究的创新点 | 第125页 |
| ·展望 | 第125-126页 |
| 附录 | 第126-131页 |
| 参考文献 | 第131-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
| 博士期间发表的论文 | 第151页 |
