| 致谢 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第14-31页 |
| 1.1 着丝粒是确保遗传物质精确传递的关键染色质元件 | 第14-20页 |
| 1.1.1 着丝粒的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 着丝粒特异性DNA序列 | 第15-17页 |
| 1.1.3 着丝粒特异性组蛋白变体CENP-A是着丝粒精确定位的表观遗传标志 | 第17-18页 |
| 1.1.4 着丝粒特异性CENP-A核小体的结构和组装 | 第18-20页 |
| 1.2 动粒是由蛋白质复合物组成的生物大分子机器 | 第20-22页 |
| 1.3 着丝粒是动粒组装的结构基础 | 第22-23页 |
| 1.4 在裂殖酵母中造成着丝粒失活的方法及细胞存活机制 | 第23-24页 |
| 1.5 裂殖酵母中生殖隔离现象的主要机制研究 | 第24-25页 |
| 1.6 进化新着丝粒和人类新着丝粒 | 第25-27页 |
| 1.7 核小体组装及染色质复制的保真性及表观遗传稳定性 | 第27-28页 |
| 1.8 着丝粒区域CENP-A核小体和异染色质区域H3K9me2核小体的表观遗传稳定性 | 第28-31页 |
| 1.8.1 着丝粒和异染色质是典型的具有表观遗传特征的结构域 | 第28页 |
| 1.8.2 花斑位置效应(PEV)是监测染色质水平表观遗传变化的有效指示器 | 第28-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-44页 |
| 2.1.1 大肠杆菌 | 第31页 |
| 2.1.2 裂殖酵母菌株 | 第31页 |
| 2.1.3 分子生物学工具酶及试剂盒 | 第31页 |
| 2.1.4 主要试剂及耗材 | 第31-34页 |
| 2.1.5 主要仪器和设备 | 第34-36页 |
| 2.1.6 常用培养基的配制 | 第36-39页 |
| 2.1.7 主要缓冲溶液的配制 | 第39-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-52页 |
| 2.2.1 分子克隆 | 第44页 |
| 2.2.2 裂殖酵母基因组提取 | 第44-45页 |
| 2.2.3 裂殖酵母转化 | 第45-46页 |
| 2.2.4 多抗性裂殖酵母菌株的构建和孢子存活率统计 | 第46页 |
| 2.2.5 Drop Test | 第46-47页 |
| 2.2.6 荧光显微镜观察及定量分析 | 第47-48页 |
| 2.2.7 谱系分析(Pedigree analysis)和花斑模式分析 | 第48页 |
| 2.2.8 Western Blot,TAP纯化和质谱分析 | 第48页 |
| 2.2.9 染色质免疫共沉淀(ChIP)和高通量二代测序(high-throughputsequencing) | 第48-51页 |
| 2.2.10 ChIP-Seq高通量数据分析 | 第51-52页 |
| 3 结果与讨论(第一部分) | 第52-72页 |
| 3.1 内层动粒维持正常的着丝粒区域染色质结构以及确保正确的着丝粒位置 | 第53-56页 |
| 3.1.1 内层动粒突变体造成着丝粒两侧异染色质不同程度地蔓延进入着丝粒中央区域 | 第53-55页 |
| 3.1.2 内层动粒突变体mhf2A和fta6△cnp3△造成着丝粒失活 | 第55-56页 |
| 3.2 CENP-T-W-X-S单个敲除菌株造成着丝粒失活以及新着丝粒的形成 | 第56-62页 |
| 3.2.1 着丝粒的失活独立地发生于减数分裂完成后 | 第56-59页 |
| 3.2.2 新着丝粒倾向形成于着丝粒两侧的异染色质区域 | 第59-62页 |
| 3.3 减数分裂中新着丝粒和自然内源性着丝粒的不兼容会造成生殖隔离 | 第62-66页 |
| 3.3.1 携带新着丝粒和自然内源性着丝粒的合子的减数分裂后代的存活率低 | 第62-63页 |
| 3.3.2 同源染色体上新着丝粒和自然内源性着丝粒之间的不匹配造成减数分裂过程中染色体的异常分离 | 第63-66页 |
| 3.4 携带cen1~(inactive)的mhf2△胞能使mhf2+细胞中自然内源性的1号着丝粒失活 | 第66-69页 |
| 3.5 mhf2△中着丝粒的失活不依赖于异染色质的形成 | 第69-70页 |
| 3.6 讨论 | 第70-72页 |
| 4 结果与讨论(第二部分) | 第72-98页 |
| 4.1 敲除ccpl造成基因组不同位点的PEV表观遗传转换频率的降低 | 第73-78页 |
| 4.2 Ccp1特异性地结合着丝粒的中央区域 | 第78-81页 |
| 4.3 ccp1△影响着丝粒的有丝分裂功能但不改变着丝粒区域Cnp1的定位 | 第81-83页 |
| 4.4 Ccp1和内层动粒蛋白Mis6着丝粒区域的正常定位是互相影响和依赖的 | 第83-85页 |
| 4.5 核仁蛋白Gar2和Ccpl共同参与调控着丝粒表观遗传稳定性 | 第85-91页 |
| 4.6 ccpl△影响着丝粒两侧区域和近端粒区域的异染色质分布 | 第91-93页 |
| 4.7 讨论 | 第93-98页 |
| 4.7.1 表观遗传稳定性的精密调控机制 | 第93-94页 |
| 4.7.2 Ccpl功能的多样性 | 第94-98页 |
| 5 综述 | 第98-105页 |
| 近端粒区域的异染色质分布在不同的遗传改变下是高度可变的 | 第100-102页 |
| CEN-PEV表观遗传的精密调控机制 | 第102-105页 |
| 参考文献 | 第105-121页 |
| 作者简历及在校期间取得的科研成果 | 第121-122页 |
