| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第14-46页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第14-21页 |
| 1.1.1 病原学 | 第14-18页 |
| 1.1.2 PRRSV引起免疫抑制机理 | 第18-21页 |
| 1.2 免疫蛋白酶体研究进展 | 第21-45页 |
| 1.2.1 免疫蛋白酶体:结构、组装、调节和功能 | 第23-32页 |
| 1.2.2 免疫蛋白酶体在疾病病理中的作用 | 第32-42页 |
| 1.2.3 研究免疫蛋白酶体功能的策略 | 第42-43页 |
| 1.2.4 研究免疫蛋白酶体的意义 | 第43-45页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第45-46页 |
| 第2章 IFN-γ与LPS协同刺激后PAM细胞的转录组学分析研究 | 第46-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第46-48页 |
| 2.1.1 实验动物与细胞 | 第46页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 2.1.3 常用试剂配制 | 第47页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第47-48页 |
| 2.1.5 主要耗材 | 第48页 |
| 2.1.6 论文中所使用的引物 | 第48页 |
| 2.1.7 统计学方法 | 第48页 |
| 2.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 2.2.1 原代猪肺泡巨噬细胞的分离及培养 | 第48-49页 |
| 2.2.2 高通量转录组测序 | 第49页 |
| 2.2.3 细胞总RNA的提取 | 第49页 |
| 2.2.4 cDNA的合成 | 第49-50页 |
| 2.2.5 Real-Time PCR (RT-PCR) | 第50-51页 |
| 2.3 结果 | 第51-58页 |
| 2.3.1 与MO型PAMs相比,IFN-γ与LPS刺激下PAMs的转录组分析 | 第51-53页 |
| 2.3.2 与MO型PAMs相比,M1型PAMs内差异表达上调或下调基因的鉴定 | 第53-54页 |
| 2.3.3 与M0型PAMs相比,M1型PAMs内参与限制病毒复制相关基因的表达水平 | 第54-57页 |
| 2.3.4 与M0型PAMs相比,M1型PAMs内参与抗原水解和递呈相关基因的表达水平 | 第57-58页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第58-61页 |
| 第3章 免疫蛋白酶体亚基LMP2,LMP7和MECL-1的克隆及表达分析 | 第61-85页 |
| 3.1 实验材料 | 第61-66页 |
| 3.1.1 实验动物、细胞与病毒 | 第61页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第61页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第61-63页 |
| 3.1.4 常用试剂配制 | 第63-65页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第65页 |
| 3.1.6 主要耗材 | 第65页 |
| 3.1.7 分子生物学分析软件 | 第65页 |
| 3.1.8 论文中所使用的引物 | 第65-66页 |
| 3.2 实验方法 | 第66-76页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第66页 |
| 3.2.2 原代猪肺泡巨噬细胞的分离及培养 | 第66页 |
| 3.2.3 PCR扩增 | 第66-67页 |
| 3.2.4 胶回收 | 第67-68页 |
| 3.2.5 TA克隆与细菌转化试验 | 第68-69页 |
| 3.2.6 阳性克隆的鉴定及测序 | 第69页 |
| 3.2.7 重组质粒的构建 | 第69-71页 |
| 3.2.8 重组质粒的提取 | 第71-73页 |
| 3.2.9 瞬时转染 | 第73-74页 |
| 3.2.10 BCA法测定蛋白浓度 | 第74页 |
| 3.2.11 Western blotting | 第74-75页 |
| 3.2.12 IFA检测目的蛋白的表达及细胞定位 | 第75-76页 |
| 3.2.13 序列分析 | 第76页 |
| 3.3 结果 | 第76-84页 |
| 3.3.1 猪LMP2、LMP7和MECL-1的染色体定位和序列分析 | 第76-80页 |
| 3.3.2 猪LMP2、LMP7和MECL-1的亚细胞定位 | 第80-81页 |
| 3.3.3 在猪AMs细胞系中,PolyI:C诱导免疫蛋白酶体的产生 | 第81-84页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第84-85页 |
| 第4章 免疫蛋白酶体亚基在正常与炎症条件下猪肺组织的表达及分布 | 第85-106页 |
| 4.1 实验材料 | 第85-88页 |
| 4.1.1 实验动物、细胞与病毒 | 第85-86页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第86-87页 |
| 4.1.3 常用试剂配制 | 第87页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第87页 |
| 4.1.5 主要耗材 | 第87-88页 |
| 4.1.6 论文中所使用的引物 | 第88页 |
| 4.2 实验方法 | 第88-93页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第88页 |
| 4.2.2 原代猪肺泡巨噬细胞的分离及培养 | 第88页 |
| 4.2.3 PRRSV的增殖 | 第88-89页 |
| 4.2.4 病毒滴度测定 | 第89页 |
| 4.2.5 细胞总RNA的提取 | 第89-90页 |
| 4.2.6 cDNA的合成 | 第90页 |
| 4.2.7 Real-Time PCR (RT-PCR) | 第90页 |
| 4.2.8 BCA法测定蛋白浓度 | 第90页 |
| 4.2.9 Western blotting | 第90页 |
| 4.2.10 IFA检测目的蛋白的表达及细胞定位 | 第90页 |
| 4.2.11 组织病理切片相关实验 | 第90-93页 |
| 4.2.12 统计学方法 | 第93页 |
| 4.3 结果 | 第93-102页 |
| 4.3.1 猪肺内免疫蛋白酶体的表达 | 第93-95页 |
| 4.3.2 在原代AMs中,LMP2表达的验证 | 第95-97页 |
| 4.3.3 在原代AM和传代AM细胞系中,IFN-γ诱导免疫蛋白酶体的表达情况 | 第97-98页 |
| 4.3.4 PRRSV感染后肺内免疫蛋白酶体的表达情况 | 第98-100页 |
| 4.3.5 在体外感染PRRSV后,原代AMs中免疫蛋白酶体的表达情况 | 第100-102页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第102-106页 |
| 第5章 HP-PRRSV抑制IFN-γ介导的免疫蛋白酶体的表达 | 第106-122页 |
| 5.1 实验材料 | 第106-108页 |
| 5.1.1 实验动物、细胞与病毒 | 第106页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第106-107页 |
| 5.1.3 常用试剂配制 | 第107页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第107页 |
| 5.1.5 主要耗材 | 第107页 |
| 5.1.6 论文中所使用的引物 | 第107-108页 |
| 5.2 实验方法 | 第108-110页 |
| 5.2.1 原代猪肺泡巨噬细胞的分离及培养 | 第108页 |
| 5.2.2 PRRSV的增殖 | 第108页 |
| 5.2.3 病毒滴度测定 | 第108页 |
| 5.2.4 细胞总RNA的提取 | 第108页 |
| 5.2.5 cDNA的合成 | 第108页 |
| 5.2.6 Real-Time PCR(RT-PCR) | 第108页 |
| 5.2.7 BCA法测定蛋白浓度 | 第108页 |
| 5.2.8 Western blotting | 第108-109页 |
| 5.2.9 IFA检测目的蛋白的表达 | 第109页 |
| 5.2.10 流式细胞术 | 第109页 |
| 5.2.11 统计学方法 | 第109-110页 |
| 5.3 结果 | 第110-118页 |
| 5.3.1 在PAMs中,HP-PRRSV抑制IFN-γ介导的免疫蛋白的诱导表达 | 第110-113页 |
| 5.3.2 在PAMs中,HP-PRRSV以剂量依赖的方式抑制IFN-γ介导的免疫蛋白的诱导表达 | 第113-114页 |
| 5.3.3 在RNA水平上,HP-PRRSV抑制IFN-γ介导的免疫蛋白酶体的诱导表达 | 第114-116页 |
| 5.3.4 HP-PRRSV调控IFN-γ介导免疫蛋白诱导表达的分子机制初探 | 第116-118页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第118-122页 |
| 全文结论 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-150页 |
| 附录 | 第150-153页 |
| 致谢 | 第153-155页 |
| 作者简介 | 第155-156页 |
