| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| 1.1 核糖体滞留与核糖体拯救 | 第9页 |
| 1.2 反式翻译 | 第9-12页 |
| 1.2.1 反式翻译的发生机制 | 第10页 |
| 1.2.2 反式翻译的生理意义 | 第10-11页 |
| 1.2.3 反式翻译的底物 | 第11-12页 |
| 1.3 核糖体滞留与基因的转录后水平调控 | 第12页 |
| 1.4 研究内容、目的及意义 | 第12-14页 |
| 1.5 技术路线 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-19页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 引物 | 第15-16页 |
| 2.1.3 分子生物操作技术常用酶及抗体 | 第16页 |
| 2.1.4 试剂与药品 | 第16-17页 |
| 2.1.5 培养基及试剂配方 | 第17-18页 |
| 2.1.6 抗生素及其他药品试剂的配方 | 第18页 |
| 2.1.7 仪器和设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-25页 |
| 2.2.1 菌株的活化与保藏 | 第19页 |
| 2.2.2 质粒提取 | 第19页 |
| 2.2.3 细菌基因组DNA提取 | 第19页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第19-20页 |
| 2.2.5 融合PCR的方法 | 第20-21页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶切胶产物回收 | 第21页 |
| 2.2.7 PCR产物纯化回收 | 第21页 |
| 2.2.8 大肠杆菌电击感受态的制备 | 第21页 |
| 2.2.9 DNA片段与载体的酶切与连接 | 第21-22页 |
| 2.2.10 大肠杆菌电击转化 | 第22页 |
| 2.2.11 双亲结合 | 第22-23页 |
| 2.2.12 维氏气单胞菌生长曲线的测定 | 第23页 |
| 2.2.13 His_6/Flag标签蛋白的Western blot检测 | 第23-24页 |
| 2.2.14 维氏气单胞菌反式翻译底物的纯化 | 第24页 |
| 2.2.15 反式翻译底物的质谱鉴定 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-44页 |
| 3.1 维氏气单胞菌tmRNA突变体(MutmRNA)的构建与表达 | 第25-32页 |
| 3.1.1 tmRNA标记肽突变位点的设计 | 第25-28页 |
| 3.1.2 tmRNA突变体表达载体的构建 | 第28-30页 |
| 3.1.3 tmRNA突变体对△tmRNA生长缺陷的回补 | 第30-31页 |
| 3.1.4 tmRNA突变体标记蛋白的Western检测 | 第31-32页 |
| 3.2 维氏气单胞菌反式翻译底物的纯化与鉴定 | 第32-40页 |
| 3.2.1 维氏气单胞菌反式翻译底物的纯化分离 | 第32-33页 |
| 3.2.2 维氏气单胞菌反式翻译底物的质谱鉴定与验证 | 第33-34页 |
| 3.2.3 维氏气单胞菌SmpB-MutmRNA在E.coli BL21中的功能验证 | 第34-37页 |
| 3.2.4 FLAG-PspA在BL21中表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.2.5 E.coli BL21中截短体FLAG-PspA的检测 | 第39-40页 |
| 3.3 维氏气单胞菌反式翻译底物滞留位点的研究 | 第40-44页 |
| 3.3.1 维氏气单胞菌反式翻译底物标记位点的质谱鉴定 | 第40-42页 |
| 3.3.2 AsmA引起核糖体滞留机制预测 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 核糖体滞留与基因表达的调控 | 第44页 |
| 4.2 tmRNA突变体的构建 | 第44页 |
| 4.3 反式翻译底物的纯化 | 第44-45页 |
| 4.4 反式翻译底物的质谱鉴定 | 第45页 |
| 4.5 反式翻译底物的验证 | 第45-46页 |
| 4.6 反式翻译底物引起核糖体滞留机制的预测 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 基金项目资助 | 第51-52页 |
| 攻读硕士期间发表的文章 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
