| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13页 |
| 第一章 前言 | 第14-37页 |
| 1.1 Geminin蛋白 | 第14-21页 |
| 1.1.1 Geminin的分子结构 | 第14-15页 |
| 1.1.2 Geminin的功能 | 第15-21页 |
| 1.1.2.1 Geminin调控DNA复制 | 第15-17页 |
| 1.1.2.2 Geminin与细胞增殖 | 第17页 |
| 1.1.2.3 Geminin与胚胎发育 | 第17-19页 |
| 1.1.2.4 Geminin与同源异形盒蛋白基因或蛋白的作用 | 第19-20页 |
| 1.1.2.5 Geminin与肿瘤 | 第20-21页 |
| 1.2 组蛋白去乙酰化酶家族 | 第21-25页 |
| 1.2.1 HDAC的分类 | 第22-23页 |
| 1.2.2 HDAC的结构与功能 | 第23-25页 |
| 1.2.2.1 第Ⅰ类HDAC | 第23页 |
| 1.2.2.2 第Ⅱ类HDAC | 第23-24页 |
| 1.2.2.3 第Ⅲ类HDAC | 第24页 |
| 1.2.2.4 第Ⅳ类HDAC | 第24-25页 |
| 1.3 FoxO蛋白家族 | 第25-35页 |
| 1.3.1 FoxO蛋白家族的结构 | 第25-26页 |
| 1.3.2 FoxO蛋白表达和活性的调控 | 第26-32页 |
| 1.3.2.1 FoxO蛋白家族的转录调控 | 第26页 |
| 1.3.2.2 FoxO蛋白家族的转录后修饰 | 第26-32页 |
| 1.3.2.2.1 FoxO蛋白的磷酸化 | 第26-28页 |
| 1.3.2.2.2 FoxO蛋白的乙酰化 | 第28-31页 |
| 1.3.2.2.3 FoxO蛋白的泛素化 | 第31-32页 |
| 1.3.2.2.4 FoxO蛋白的甲基化 | 第32页 |
| 1.3.2.2.5 FoxO蛋白的糖基化 | 第32页 |
| 1.3.3 FoxO蛋白家族的生物学功能 | 第32-35页 |
| 1.3.3.1 FoxO蛋白参与细胞周期 | 第33页 |
| 1.3.3.2 FoxO蛋白参与细胞增殖与凋亡 | 第33-34页 |
| 1.3.3.3 FoxO蛋白参与细胞分化 | 第34页 |
| 1.3.3.4 FoxO蛋白参与细胞代谢 | 第34-35页 |
| 1.3.3.5 FoxO蛋白参与DNA损伤修复 | 第35页 |
| 1.3.3.6 FoxO蛋白参与抗氧化应激 | 第35页 |
| 1.3.3.7 FoxO蛋白参与细胞自噬 | 第35页 |
| 1.4 立题背景、内容和意义 | 第35-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-71页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-44页 |
| 2.1.1 菌株和细胞株 | 第37页 |
| 2.1.2 质粒载体 | 第37-40页 |
| 2.1.2.1 pLV-H1-EF1α-puromycin/Blasticidin | 第37-38页 |
| 2.1.2.2 pLVX-IRES-Neo | 第38-39页 |
| 2.1.2.3 pGEX-4T-1 | 第39页 |
| 2.1.2.4 pET-21b | 第39-40页 |
| 2.1.3 主要试剂与材料 | 第40-42页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第42-44页 |
| 2.2 常用溶液配方 | 第44-50页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态的制备和质粒转化相关溶液 | 第44页 |
| 2.2.2 质粒DNA制备相关溶液 | 第44-45页 |
| 2.2.3 细胞培养、转染和感染相关溶液 | 第45-46页 |
| 2.2.4 生化实验相关溶液 | 第46-50页 |
| 2.3 实验方法 | 第50-70页 |
| 2.3.1 分子克隆相关实验方法 | 第50-58页 |
| 2.3.1.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第50-51页 |
| 2.3.1.2 PCR反应 | 第51-52页 |
| 2.3.1.3 DNA的琼脂糖凝胶电泳及回收 | 第52-53页 |
| 2.3.1.4 目的片段的酶切、连接与转化 | 第53-56页 |
| 2.3.1.5 质粒的扩增与提取 | 第56-57页 |
| 2.3.1.5.1 小规模质粒扩增与提取 | 第56页 |
| 2.3.1.5.2 大规模质粒扩增与提取 | 第56-57页 |
| 2.3.1.6 质粒的酶切与测序鉴定 | 第57页 |
| 2.3.1.7 基因定点突变 | 第57-58页 |
| 2.3.2 基因组DNA的提取 | 第58-59页 |
| 2.3.3 RNA的相关实验 | 第59-61页 |
| 2.3.3.1 RNA的提取 | 第59-60页 |
| 2.3.3.2 RNA的逆转录 | 第60页 |
| 2.3.3.3 实时荧光定量PCR | 第60-61页 |
| 2.3.4 RNA干扰载体的构建 | 第61-62页 |
| 2.3.5 蛋白相关实验 | 第62-67页 |
| 2.3.5.1 制备全细胞裂解液 | 第62页 |
| 2.3.5.2 蛋白浓度测定 | 第62页 |
| 2.3.5.3 蛋白免疫印迹 | 第62-64页 |
| 2.3.5.4 荧光素酶活性检测 | 第64页 |
| 2.3.5.5 融合蛋白的表达和纯化 | 第64-65页 |
| 2.3.5.6 谷胱甘肽巯基转移酶沉淀实验 | 第65-66页 |
| 2.3.5.7 免疫共沉淀实验 | 第66-67页 |
| 2.3.5.8 免疫荧光实验 | 第67页 |
| 2.3.6 细胞培养及相关实验 | 第67-70页 |
| 2.3.6.1 细胞培养 | 第67-68页 |
| 2.3.6.2 细胞传代 | 第68页 |
| 2.3.6.3 细胞转染及病毒感染 | 第68-70页 |
| 2.3.6.3.1 磷酸钙转染法 | 第68-69页 |
| 2.3.6.3.2 X-tremeGENE HD转染 | 第69页 |
| 2.3.6.3.3 慢病毒介导的RNA干扰 | 第69-70页 |
| 2.3.6.3.4 慢病毒感染 | 第70页 |
| 2.4 数据统计分析和图片处理 | 第70-71页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第71-91页 |
| 3.1 实验结果 | 第71-88页 |
| 3.1.1 Geminin与FoxO3相互作用 | 第71-75页 |
| 3.1.1.1 Geminin直接与FoxO3相互作用 | 第71-72页 |
| 3.1.1.2 FoxO3的第130位谷氨酸残基与Geminin相互作用 | 第72-74页 |
| 3.1.1.3 FoxO3通过DBD结构域与Geminin相互作用 | 第74-75页 |
| 3.1.2 FoxO1与Geminin有相互作用 | 第75-78页 |
| 3.1.2.1 FoxO1与Geminin有直接相互作用 | 第75-76页 |
| 3.1.2.2 FoxO1的DBD结构域与Geminin相互作用 | 第76-78页 |
| 3.1.3 Cdt1不干预Geminin与FoxO3的相互作用 | 第78-79页 |
| 3.1.4 Geminin作为一个支架蛋白连接HDAC3和FoxO3 | 第79-85页 |
| 3.1.4.1 Geminin直接与HDAC3相互作用 | 第79-80页 |
| 3.1.4.2 Geminin通过E101和E104位点与HDAC3相互作用 | 第80-81页 |
| 3.1.4.3 Geminin介导HDAC3与FoxO3的相互作用 | 第81-82页 |
| 3.1.4.4 HDAC3、Geminin和FoxO3的相互作用 | 第82-84页 |
| 3.1.4.5 HDAC3、Geminin 和 Fox03 共定位到细胞核 | 第84-85页 |
| 3.1.5 Geminin通过HDAC3调控FoxO3的乙酰化修饰 | 第85-88页 |
| 3.2 讨论 | 第88-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
