| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第14-19页 |
| 0.1 硒蛋白 | 第14-15页 |
| 0.2 腺病毒载体的研究进展 | 第15-16页 |
| 0.3 胞内钙稳态失衡与细胞凋亡的研究现状 | 第16-17页 |
| 0.4 细胞迁移和黏附 | 第17-18页 |
| 0.5 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 第1章 人硒蛋白SelK对肿瘤细胞钙稳态及凋亡的影响 | 第19-36页 |
| 1.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 1.1.1 细胞和质粒 | 第19-20页 |
| 1.1.2 培养基和试剂 | 第20-21页 |
| 1.2 实验方法 | 第21-23页 |
| 1.2.1 细胞的培养 | 第21页 |
| 1.2.2 脂质体转染 | 第21-22页 |
| 1.2.3 MTT法检测细胞活力 | 第22页 |
| 1.2.4 流式细胞仪检测胞浆游离钙 | 第22-23页 |
| 1.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第23页 |
| 1.3 实验结果 | 第23-34页 |
| 1.3.1 人硒蛋白SelK过表达对肿瘤细胞和正常细胞活力的影响 | 第23-26页 |
| 1.3.2 人硒蛋白SelK过表达对肿瘤和正常细胞胞浆游离Ca~(2+)浓度的影响 | 第26-29页 |
| 1.3.3 人硒蛋白SelK过表达诱导肿瘤细胞凋亡的激光共聚焦图像 | 第29-32页 |
| 1.3.4 人硒蛋白SelK过表达诱导肿瘤细胞凋亡的流式细胞仪检测 | 第32-34页 |
| 1.4 分析与讨论 | 第34-35页 |
| 1.5 小结 | 第35-36页 |
| 第2章 人硒蛋白SelK对肿瘤细胞黏附及迁移能力的影响 | 第36-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 2.1.1 细胞和质粒 | 第36-37页 |
| 2.1.2 实验用试剂 | 第37页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第37-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第38页 |
| 2.2.2 脂质体转染 | 第38页 |
| 2.2.3 黏附实验检测细胞对胞外基质胶的黏附力 | 第38页 |
| 2.2.4 Transwell法检测细胞的迁移能力 | 第38-39页 |
| 2.2.5 统计学方法 | 第39页 |
| 2.3 实验结果 | 第39-44页 |
| 2.3.1 人硒蛋白SelK过表达对肿瘤细胞和正常细胞黏附能力的影响 | 第39-41页 |
| 2.3.2 人硒蛋白SelK过表达对肿瘤细胞和正常细胞迁移能力的影响 | 第41-44页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第44-45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 第3章 小鼠硒蛋白mSelK腺病毒载体的构建及对肿瘤细胞的影响 | 第46-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-49页 |
| 3.1.1 常用酶和试剂盒 | 第46-47页 |
| 3.1.2 菌种与质粒 | 第47页 |
| 3.1.3 实验用的细胞 | 第47页 |
| 3.1.4 实验材料及抗体 | 第47-48页 |
| 3.1.5 实验仪器 | 第48页 |
| 3.1.6 常用生化试剂 | 第48-49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-54页 |
| 3.2.1 PCR扩增目的基因片段mSelK-secis | 第49-50页 |
| 3.2.2 穿梭载体pShuttle-CMV-SelK的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.3 pShuttle-AdEasy-mSelK的同源重组及鉴定 | 第51页 |
| 3.2.4 重组腺病毒的包装并扩大培养 | 第51-52页 |
| 3.2.5 重组腺病毒表达载体的鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2.6 重组腺病毒纯化 | 第53-54页 |
| 3.2.7 MTT法检测细胞活力的影响 | 第54页 |
| 3.2.8 流式细胞仪检测胞浆游离Ca~(2+)浓度变化 | 第54页 |
| 3.3 实验结果 | 第54-58页 |
| 3.3.1 电泳结果 | 第55-56页 |
| 3.3.2 WesternBlot验证重组目的蛋白的表达 | 第56-57页 |
| 3.3.3 Ad-mSelK-secis过表达对HepG-2和HEK-293细胞活力的影响 | 第57页 |
| 3.3.4 Ad-mSelK-secis过表达对HepG-2细胞胞浆游离Ca~(2+)浓度的影响 | 第57-58页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第58-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 结论与展望 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 攻读学位期间发表学术论文及参加科研情况 | 第67-68页 |
