| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 溶菌酶的简介 | 第11-14页 |
| 1.1.1 溶菌酶的性质和结构 | 第11页 |
| 1.1.2 溶菌酶的基因结构 | 第11-12页 |
| 1.1.3 溶菌酶的生物学功能 | 第12页 |
| 1.1.4 溶菌酶的分类 | 第12-14页 |
| 1.2 溶菌酶的应用 | 第14-15页 |
| 1.2.1 溶菌酶在食品中的应用 | 第14页 |
| 1.2.2 溶菌酶在养殖中的应用 | 第14页 |
| 1.2.3 溶菌酶在医疗中的应用 | 第14-15页 |
| 1.3 毕赤酵母的简述 | 第15-16页 |
| 1.3.1 毕赤酵母的应用 | 第15页 |
| 1.3.2 甲醇营养型毕赤酵母的优点 | 第15-16页 |
| 1.4 溶菌酶的分离纯化 | 第16-17页 |
| 1.4.1 结晶法 | 第16页 |
| 1.4.2 亲和层析法 | 第16页 |
| 1.4.3 超滤 | 第16-17页 |
| 1.4.4 反胶团萃取 | 第17页 |
| 1.5 溶菌酶的纯度检测 | 第17-18页 |
| 1.5.1 高效液相色谱法 | 第17页 |
| 1.5.2 质谱分析 | 第17-18页 |
| 1.6 研究目的、内容和技术路线 | 第18-20页 |
| 1.6.1 研究目的和内容 | 第18页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第18-20页 |
| 第二章 海参i-型溶菌酶5L和30L发酵及放大培养 | 第20-38页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 材料及仪器 | 第20-22页 |
| 2.2.1 种子液培养基 | 第20-21页 |
| 2.2.2 发酵罐培养基 | 第21页 |
| 2.2.3 蛋白分离纯化常用溶液和缓冲溶液 | 第21页 |
| 2.2.4 实验仪器与设备 | 第21-22页 |
| 2.3 发酵罐(5L)发酵培养 | 第22-25页 |
| 2.3.1 电极的校正 | 第22-23页 |
| 2.3.2 接种及初始培养 | 第23页 |
| 2.3.3 甘油流加阶段 | 第23页 |
| 2.3.4 甲醇诱导阶段 | 第23-24页 |
| 2.3.5 海参i-型溶菌酶的纯化 | 第24页 |
| 2.3.6 抑菌活性分析方法 | 第24-25页 |
| 2.4 发酵罐(30L)发酵培养 | 第25-29页 |
| 2.4.1 发酵罐的灭菌 | 第25页 |
| 2.4.2 接种及基础生长阶段 | 第25页 |
| 2.4.3 甘油流加阶段 | 第25页 |
| 2.4.4 甲醇诱导阶段 | 第25页 |
| 2.4.5 i-型溶菌酶蛋白的分离与纯化 | 第25-27页 |
| 2.4.6 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第27-28页 |
| 2.4.7 溶菌酶酶活检测 | 第28-29页 |
| 2.5 结果与分析 | 第29-37页 |
| 2.5.1 发酵罐(5L)发酵培养结果 | 第29-34页 |
| 2.5.2 发酵罐(30L)发酵培养结果 | 第34-37页 |
| 2.6 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 海参i-型溶菌酶液相和质谱分析 | 第38-52页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料及仪器 | 第38-42页 |
| 3.2.1 样品 | 第38页 |
| 3.2.2 仪器与试剂 | 第38-39页 |
| 3.2.3 标准溶液的配制 | 第39页 |
| 3.2.4 样品溶液的配制 | 第39页 |
| 3.2.5 液相色谱条件 | 第39-41页 |
| 3.2.6 高效液相色谱测定 | 第41页 |
| 3.2.7 质谱分析 | 第41-42页 |
| 3.3 试验步骤 | 第42-43页 |
| 3.3.1 高效液相色谱使用方法 | 第42页 |
| 3.3.2 MALDI-TOF质谱仪使用方法 | 第42-43页 |
| 3.4 结果与分析 | 第43-50页 |
| 3.4.1 高效液相测定与分析 | 第43-50页 |
| 3.4.2 MALDI-TOF质谱测定与分析 | 第50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-52页 |
| 第四章 海参i-型溶菌酶酶学性质及空间结构研究 | 第52-65页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第52-53页 |
| 4.2.1 实验仪器与设备 | 第52页 |
| 4.2.2 药品与试剂 | 第52-53页 |
| 4.3 方法与步骤 | 第53-54页 |
| 4.3.1 溶菌酶活性测定 | 第53页 |
| 4.3.2 pH对溶菌酶活性及稳定性的影响 | 第53页 |
| 4.3.3 温度对溶菌酶活性及稳定性的影响 | 第53页 |
| 4.3.4 金属离子对溶菌酶活性的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.5 常用助溶剂对溶菌酶活性的影响 | 第54页 |
| 4.3.6 米氏常数(Km)测定 | 第54页 |
| 4.4 结果与分析 | 第54-63页 |
| 4.4.1 pH对溶菌酶活性及稳定性影响的测定与分析 | 第54-56页 |
| 4.4.2 温度对溶菌酶活性及稳定性影响的测定与分析 | 第56-57页 |
| 4.4.3 金属离子对溶菌酶活性的影响 | 第57-58页 |
| 4.4.4 常用试剂对溶菌酶活性的影响 | 第58页 |
| 4.4.5 米氏常数测定 | 第58-60页 |
| 4.4.6 最低抑菌浓度实验 | 第60页 |
| 4.4.7 海参i-型溶菌酶空间结构研究 | 第60-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第五章 结论 | 第65-66页 |
| 讨论与展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 研究生期间发表论文情况 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
