| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-19页 |
| 1.1 乙型肝炎病毒药物研究进展 | 第8-10页 |
| 1.1.1 乙型肝炎 | 第8页 |
| 1.1.2 乙型肝炎病毒 | 第8-10页 |
| 1.2 核受体研究 | 第10-12页 |
| 1.2.1 法尼脂X受体 | 第10页 |
| 1.2.2 FXR功能研究 | 第10-12页 |
| 1.3 绿茶茶多酚 | 第12-19页 |
| 1.3.1 EGCG简介 | 第12-13页 |
| 1.3.2 EGCG抗癌机制 | 第13-15页 |
| 1.3.3 EGCG抗病毒研究 | 第15-17页 |
| 1.3.4 结语 | 第17-19页 |
| 2 引言 | 第19-20页 |
| 3 材料与方法 | 第20-48页 |
| 3.1 材料 | 第20-24页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第20-21页 |
| 3.1.3 实验试剂与耗材 | 第21-24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-41页 |
| 3.2.1 HepG2.2.15细胞mRNA的提取及反转cDNA | 第24-27页 |
| 3.2.2 目地基因的克隆 | 第27-29页 |
| 3.2.3 重组表达载体pET28a-FXRα和pET28a-RXRa质粒构建 | 第29-31页 |
| 3.2.4 重组蛋白FXR和RXR的表达与鉴定 | 第31-33页 |
| 3.2.5 重组蛋白HMN的纯化与复性 | 第33-34页 |
| 3.2.6 抗体检测及其效价测定 | 第34-35页 |
| 3.2.7 真核载体构建 | 第35-39页 |
| 3.2.8 真核细胞转染 | 第39-40页 |
| 3.2.9 PBA亲和层析鉴定FXRα和RXRα与EGCG结合情况 | 第40-41页 |
| 3.2.10 DARTS试验 | 第41页 |
| 3.3 结果 | 第41-48页 |
| 3.3.1 HepG202.15细胞的RNA提取 | 第41-42页 |
| 3.3.2 FXRα和RXRα基因扩增与克隆 | 第42页 |
| 3.3.3 FXRα和RXRα克隆载体双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.4 重组载体pET28a-FXRα和pET28a-RXRα双酶切鉴定 | 第43页 |
| 3.3.5 蛋白诱导表达图片 | 第43-44页 |
| 3.3.6 多克隆抗体WB检测及效价检测 | 第44页 |
| 3.3.7 HBVENⅡ&CP双酶切图片 | 第44-45页 |
| 3.3.8 真核表达载体pcDNA3.1-FXRα和RXRα双酶切鉴定 | 第45页 |
| 3.3.9 真核转染荧光素酶检测 | 第45-46页 |
| 3.3.10 PBA亲和层析鉴定EGCG结合蛋白 | 第46页 |
| 3.3.11 DARTS实验鉴定EGCG与核受体结合 | 第46-48页 |
| 4 结论与讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 重组蛋白的原核表达 | 第48-49页 |
| 4.1.1 重组蛋白的原核表达体系 | 第48页 |
| 4.1.2 重组蛋白原核表达体系构建 | 第48页 |
| 4.1.3 重组蛋白表达纯化与复性 | 第48-49页 |
| 4.2 荧光素酶报告基因检测核受体对HBV转录调控的影响 | 第49页 |
| 4.3 真核细胞中蛋白与EGCG结合验证 | 第49-51页 |
| 4.3.1 PBA-EGCG亲和层析法鉴定蛋白与EGCG结合 | 第49页 |
| 4.3.2 DARTS(drugaffinityresponsivetargetstability)鉴定核受体与EGCG结合 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| ABSTRACT | 第56-57页 |
