| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| ·转录因子T-bet及其与类风湿性关节炎的关系 | 第16-27页 |
| ·T-bet的结构 | 第16页 |
| ·T-bet的生物学功能 | 第16-20页 |
| ·CD4~+的T细胞亚群 | 第16-17页 |
| ·T-bet与Th1细胞极化 | 第17-19页 |
| ·Th0细胞源性T-bet与Th1细胞极化 | 第17-19页 |
| ·DC源性T-bet与IFN-γ的分泌及Th1细胞分化 | 第19页 |
| ·T-bet与IFN-γ基因的调节 | 第19-20页 |
| ·T-bet与B淋巴细胞的分化 | 第20页 |
| ·T-bet的反馈调节 | 第20-21页 |
| ·T-bet与类风湿性关节炎 | 第21-22页 |
| ·RNA干扰 | 第22-27页 |
| ·RNA干扰及其机制 | 第22-24页 |
| ·siRNA的设计原理 | 第24-25页 |
| ·RNA干扰的应用和发展 | 第25-27页 |
| ·本论文研究的目的、意义、方法和实验方案的设计 | 第27-28页 |
| ·研究目的: | 第27页 |
| ·研究意义: | 第27页 |
| ·研究方法和技术: | 第27页 |
| ·实验方案的设计: | 第27-28页 |
| 第二章 胶原诱导的小鼠关节炎模型的建立 | 第28-36页 |
| ·材料与方法 | 第28-31页 |
| ·动物和主要材料 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-31页 |
| ·不完全弗氏佐剂(IFA)和完全弗氏佐剂(CFA)的制备 | 第29页 |
| ·CⅡ溶液的制备 | 第29页 |
| ·CⅡ免疫小鼠 | 第29页 |
| ·观察结果 | 第29-30页 |
| ·荧光定量PCR检测CIA小鼠脾脏以及局部关节的T-bet,IFN-γ和IL-17表达的水平 | 第30-31页 |
| ·实验结果 | 第31-35页 |
| ·二次免疫后小鼠关节炎发病时间以及炎症得分 | 第31-32页 |
| ·模型建立成功的小鼠照片以及病理组织的HE染色图片 | 第32-33页 |
| ·CIA小鼠照片 | 第32-33页 |
| ·CIA小鼠关节HE染色图片 | 第33页 |
| ·CIA小鼠脾脏和局部关节T-bet,IFN-γ和IL-17的表达水平检测结果 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 T-bet特异性shRNA真核质粒的构建及其功能研究 | 第36-49页 |
| ·材料和方法 | 第36-43页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要溶液和其他试剂材料 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·方法 | 第38-43页 |
| ·shRNA靶序列的选择合成 | 第38页 |
| ·表达质粒的线性化 | 第38-39页 |
| ·T-bet靶向性shRNA真核表达载体的构建与鉴定 | 第39-41页 |
| ·感受态DH5α菌的制备 | 第39页 |
| ·连接产物转化感受态DH5α菌 | 第39-40页 |
| ·试剂盒小量提取质粒 | 第40页 |
| ·试剂盒大量提取质粒 | 第40-41页 |
| ·质粒浓度的测定 | 第41页 |
| ·细胞转染 | 第41-42页 |
| ·MTT试验 | 第42页 |
| ·Real-time PCR检测T-bet以及IFN-γ mRNA表达量 | 第42页 |
| ·Western blot检测转染DC2.4细胞T-bet蛋白含量变化 | 第42页 |
| ·流式细胞仪检测DC2.4细胞表面分子 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-47页 |
| ·酶切结果 | 第43页 |
| ·测序结果 | 第43-44页 |
| ·质粒转染DC2.4细胞结果 | 第44-45页 |
| ·重组质粒对T-bet mRNA表达水平的抑制作用 | 第45页 |
| ·重组质粒对T-bet蛋白表达水平的抑制作用 | 第45-46页 |
| ·重组质粒对DC2.4细胞IFN-γ基因表达水平的影响 | 第46页 |
| ·干扰T-bet后对DC2.4细胞表面标志的影响 | 第46页 |
| ·干扰T-bet后DC2.4增殖能力 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 T-bet干预胶原诱导关节炎小鼠局部关节 | 第49-58页 |
| ·材料和方法 | 第49-52页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·分组及构建模型 | 第49-50页 |
| ·病理组织切片染色以及免疫组化分析 | 第50-51页 |
| ·石蜡切片 | 第50页 |
| ·石蜡切片脱蜡 | 第50页 |
| ·抗原热修复 | 第50页 |
| ·免疫组化染色 | 第50页 |
| ·苏木素复染细胞核 | 第50-51页 |
| ·荧光定量PCR检测T-bet及其他转录因子和细胞因子 | 第51页 |
| ·流式细胞仪检测小鼠淋巴结IFN-γ和IL-17表达 | 第51页 |
| ·磁珠分选CD4~+T细胞 | 第51页 |
| ·胞内细胞因子染色 | 第51页 |
| ·统计分析 | 第51-52页 |
| ·实验结果 | 第52-56页 |
| ·T-bet能促进CIA,沉默T-bet基因延迟CIA的发生 | 第52-53页 |
| ·HE染色结果以及组化结果 | 第53-55页 |
| ·各组小鼠脾脏以及局部滑膜细胞因子mRNA表达水平的测定 | 第55-56页 |
| ·流式细胞仪检测腹股沟淋巴结IFN-γ和IL-17表达情况 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 主要结论和展望 | 第58-60页 |
| ·主要结论 | 第58-59页 |
| ·展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第66页 |
