| 致谢 | 第5-14页 |
| 摘要 | 第14-16页 |
| 文献综述 | 第16-28页 |
| 1 PGCs的起源、发生 | 第16-17页 |
| 2 PGCs谱系限定 | 第17页 |
| 3 PGCs的迁移 | 第17-18页 |
| 4 PGCs的研究进展 | 第18-21页 |
| 4.1 各种动物PGCs的研究现状 | 第19-21页 |
| 4.1.1 人 | 第19页 |
| 4.1.2 兔 | 第19页 |
| 4.1.3 小鼠 | 第19-20页 |
| 4.1.4 鸡 | 第20页 |
| 4.1.5 猪 | 第20页 |
| 4.1.6 牛 | 第20页 |
| 4.1.7 鱼 | 第20-21页 |
| 5 PGCs的生物学特性 | 第21页 |
| 5.1 PGCs的形态和生长特性 | 第21页 |
| 5.2 PGCs分化的全能性 | 第21页 |
| 6 PGCs的分离培养 | 第21-22页 |
| 6.1 PGCs的分离方法 | 第21-22页 |
| 6.2 PGCs的传代方法 | 第22页 |
| 7 PGCs的鉴定 | 第22-23页 |
| 7.1 形态学及生长行为鉴定 | 第22页 |
| 7.2 碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定 | 第22页 |
| 7.3 发育全能性标志基因的表达 | 第22-23页 |
| 8 影响PGCs体外分离培养的因素 | 第23-26页 |
| 8.1 胚胎日龄及获取PGCs的时间 | 第23页 |
| 8.2 分离培养方法 | 第23页 |
| 8.3 饲养层 | 第23-24页 |
| 8.3.1 饲养层细胞的种类 | 第24页 |
| 8.3.2 饲养层细胞的代数和接种密度 | 第24页 |
| 8.4 培养基 | 第24页 |
| 8.5 添加物 | 第24-26页 |
| 8.5.1 血清 | 第24页 |
| 8.5.2 细胞因子及生长因子 | 第24-26页 |
| 9 PGCs的意义及应用前景 | 第26-28页 |
| 试验一 鼠、兔胚胎成纤维细胞的分离培养 | 第28-44页 |
| 引言 | 第28页 |
| 1 材料与方法 | 第28-32页 |
| 1.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第28页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 1.1.3 主要仪器与设备 | 第28-29页 |
| 1.2 主要溶液配制 | 第29-30页 |
| 1.2.1 孕马血清促性腺激素(PMSG)注射液 | 第29页 |
| 1.2.2 人绒毛膜素性腺激素(HCG)注射液 | 第29页 |
| 1.2.3 1mol/L氢氧化钠的配制 | 第29页 |
| 1.2.4 1mol/L盐酸的配制 | 第29页 |
| 1.2.5 PBS缓冲液的配制 | 第29页 |
| 1.2.6 消化液的配制 | 第29-30页 |
| 1.2.7 胚胎成纤维细胞培养液的配制 | 第30页 |
| 1.2.8 FBS的分装与冻存 | 第30页 |
| 1.2.9 双抗的分装与冻存 | 第30页 |
| 1.2.10 冻存液的配制 | 第30页 |
| 1.3 试验方法 | 第30-32页 |
| 1.3.1 试验动物超排 | 第30页 |
| 1.3.2 MEF、REF的分离培养 | 第30页 |
| 1.3.3 首次换液时间对MEF、REF的影响 | 第30-31页 |
| 1.3.4 MEF、REF的传代培养 | 第31页 |
| 1.3.5 MEF、REF细胞形态学观察 | 第31页 |
| 1.3.6 MEF、REF染色 | 第31页 |
| 1.3.7 MEF、REF生长曲线的绘制 | 第31页 |
| 1.3.8 MEF、REF的冻存与复苏 | 第31-32页 |
| 1.3.9 细胞计数 | 第32页 |
| 1.3.10 统计分析 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-41页 |
| 2.1 MEF、REF生物学特性 | 第32-33页 |
| 2.2 首次换液时间对MEF、REF的影响 | 第33-37页 |
| 2.3 MEF、REF传代培养 | 第37-38页 |
| 2.4 MEF、REF染色结果 | 第38-39页 |
| 2.4.1 MEF、REF吉姆萨染色结果 | 第38-39页 |
| 2.4.2 MEF、REFHE染色结果 | 第39页 |
| 2.5 MEF、REF生长曲线的绘制 | 第39-40页 |
| 2.6 MEF、REF冻存不同时间的复苏效果 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 3.1 鼠、兔胚胎日龄与MEF、REF的关系 | 第41-42页 |
| 3.2 首次换液时间对MEF、REF的影响 | 第42页 |
| 3.3 MEF、REF的代数对细胞活力及生长曲线的影响 | 第42页 |
| 3.4 影响MEF、REF冻存、复苏的因素 | 第42-43页 |
| 4 小结 | 第43-44页 |
| 试验二 饲养层及传代方法对兔PGCs体外分离培养的影响 | 第44-69页 |
| 引言 | 第44页 |
| 1 材料与方法 | 第44-52页 |
| 1.1 试验材料 | 第44-45页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第44页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第44-45页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第45页 |
| 1.2 主要溶液的配制 | 第45-47页 |
| 1.2.1 0.2mol/LL-谷氨酰胺存储液的配制 | 第45页 |
| 1.2.2 1mol/Lβ-巯基乙醇存储液的配制 | 第45-46页 |
| 1.2.3 100μg/mL丝裂霉素C的分装 | 第46页 |
| 1.2.4 FBS的分装与冻存 | 第46页 |
| 1.2.5 双抗的分装与冻存 | 第46页 |
| 1.2.6 明胶的配制 | 第46页 |
| 1.2.7 台盼蓝染色液的配制 | 第46页 |
| 1.2.8 PGCs培养液的配制 | 第46页 |
| 1.2.9 胚胎成纤维细胞培养液的配制 | 第46页 |
| 1.2.10 消化液的配制 | 第46-47页 |
| 1.3 试验方法 | 第47-52页 |
| 1.3.1 兔PGCs分离培养 | 第47页 |
| 1.3.2 兔PGCs的传代培养 | 第47页 |
| 1.3.3 兔PGCs的鉴定 | 第47-50页 |
| 1.3.4 不同密度饲养层对兔PGCs的影响 | 第50页 |
| 1.3.5 不同饲养层对兔PGCs的影响 | 第50页 |
| 1.3.6 不同分离方法对兔PGCs的影响 | 第50页 |
| 1.3.7 MEF、REF、混合饲养层活力的检测 | 第50-51页 |
| 1.3.8 不同传代方法对兔PGCs的影响 | 第51页 |
| 1.3.9 统计分析 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-64页 |
| 2.1 不同日龄兔生殖嵴形态 | 第52页 |
| 2.2 兔PGCs的形态鉴定 | 第52-54页 |
| 2.2.1 兔PGCs的形态观察 | 第52-53页 |
| 2.2.2 兔PGCs生长行为的观察 | 第53页 |
| 2.2.3 兔PGCs碱性磷酸酶(AKP)染色 | 第53-54页 |
| 2.2.4 兔PGCsRT-PCR检测 | 第54页 |
| 2.3 不同密度饲养层对兔PGCs的影响 | 第54-56页 |
| 2.3.1 兔PGCs在密度为5×104/mL和1×105/mL饲养层上的生长表现 | 第55页 |
| 2.3.2 兔PGCs在密度为5×105/mL饲养层上的生长表现 | 第55-56页 |
| 2.4 不同饲养层对兔PGCs的影响 | 第56-59页 |
| 2.4.1 MEF饲养层上兔PGCs的生长表现 | 第56-57页 |
| 2.4.2 REF饲养层上兔PGCs的生长表现 | 第57页 |
| 2.4.3 1:1、2:1、1:2混合饲养层上兔PGCs的生长表现 | 第57-59页 |
| 2.5 不同分离方法对兔PGCs的影响 | 第59-61页 |
| 2.6 P3代MEF、REF及混合饲养层活力的检测 | 第61-62页 |
| 2.6.1 MTT法检测饲养层活力 | 第61-62页 |
| 2.6.2 台盼蓝染色法检测MEF、REF、混合饲养层的活力 | 第62页 |
| 2.7 不同传代方法对兔PGCs的影响 | 第62-64页 |
| 3 讨论 | 第64-67页 |
| 3.1 不同胎龄对兔PGCs的影响 | 第64页 |
| 3.2 不同密度饲养层对兔PGCs的影响 | 第64-65页 |
| 3.3 不同饲养层对兔PGCs的影响 | 第65-66页 |
| 3.4 不同分离方法对兔PGCs的影响 | 第66页 |
| 3.5 不同传代方法对兔PGCs的影响 | 第66-67页 |
| 4 小结 | 第67-68页 |
| 创新点 | 第68-69页 |
| 试验三 细胞因子对兔PGCs分离培养的影响 | 第69-80页 |
| 引言 | 第69页 |
| 1 材料与方法 | 第69-72页 |
| 1.1 试验材料 | 第69-70页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第69页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第69页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第69-70页 |
| 1.2 主要溶液的配制 | 第70-71页 |
| 1.2.1 进口FBS的分装冻存 | 第70页 |
| 1.2.2 细胞因子的分装与保存 | 第70页 |
| 1.2.3 兔PGCs培养液的配制 | 第70-71页 |
| 1.2.4 不同浓度细胞因子兔PGCs细胞培养液的配制 | 第71页 |
| 1.3 试验方法 | 第71-72页 |
| 1.3.1 REF饲养层的制作 | 第71页 |
| 1.3.2 兔PGCs的分离培养 | 第71页 |
| 1.3.3 兔PGCs的鉴定 | 第71页 |
| 1.3.4 不同培养液对兔PGCs的影响 | 第71-72页 |
| 1.3.5 统计分析 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-75页 |
| 2.1 兔PGCs生长行为的观察 | 第72页 |
| 2.2 兔PGCs碱性磷酸酶(AKP)染色 | 第72-73页 |
| 2.3 兔PGCsRT-PCR检测 | 第73页 |
| 2.4 不同培养液对兔PGCs的影响 | 第73-75页 |
| 3 讨论 | 第75-78页 |
| 3.1 血清浓度对兔PGCs的影响 | 第75页 |
| 3.2 非细胞因子添加物对兔PGCs的影响 | 第75页 |
| 3.3 细胞因子及浓度对兔PGCs的影响 | 第75-78页 |
| 3.3.1 LIF | 第76页 |
| 3.3.2 bFGF | 第76-77页 |
| 3.3.3 TGF﹣β1 | 第77-78页 |
| 4 小结 | 第78-79页 |
| 创新点 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 缩写词中英对照表 | 第90-91页 |
| ABSTRACT | 第91-93页 |
| 附件 | 第94页 |
