| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第14-22页 |
| 1.1 简介 | 第14-15页 |
| 1.1.1 D-葡萄糖二酸理化性质 | 第14页 |
| 1.1.2 D-葡萄糖二酸的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 化学法生产D-葡萄糖二酸 | 第15-17页 |
| 1.2.2 生物法合成D-葡萄糖二酸 | 第17-19页 |
| 1.3 检测方法探究 | 第19-20页 |
| 1.4 论文的研究意义和研究方法 | 第20-22页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第20页 |
| 1.4.2 研究思路 | 第20-22页 |
| 第二章 蔗糖利用和D-葡萄糖二酸合成途径构建 | 第22-38页 |
| 2.1 引言 | 第22-24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.2.2 培养基、引物、酶与实验试剂 | 第24-27页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.3.1 质粒构建方法 | 第27-29页 |
| 2.3.2 重组大肠杆菌发酵 | 第29-30页 |
| 2.3.3 生物量检测 | 第30页 |
| 2.3.4 发酵产物D-葡萄糖二酸和残糖的分析检测 | 第30-31页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第31-36页 |
| 2.4.1 基因克隆与质粒构建 | 第31-33页 |
| 2.4.2 重组大肠杆菌发酵 | 第33-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-38页 |
| 第三章 葡萄糖和D-葡萄糖二酸副产物代谢途径敲除 | 第38-60页 |
| 3.1 引言 | 第38-39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第39页 |
| 3.2.2 培养基、引物、酶与实验试剂 | 第39-41页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-48页 |
| 3.3.1 敲除方法示意图 | 第41-42页 |
| 3.3.2 磷酸戊糖途径基因(zwf)的敲除 | 第42-44页 |
| 3.3.3 糖酵解途径基因(pgi)的敲除 | 第44-45页 |
| 3.3.4 糖醛酸异构酶(uxaC)的敲除 | 第45页 |
| 3.3.5 D-葡聚糖脱水酶(gudD)的敲除 | 第45页 |
| 3.3.6 葡萄糖特异性酶(ptsG)的敲除 | 第45-48页 |
| 3.3.7 原始菌与重组菌发酵 | 第48页 |
| 3.3.8 生物量检测 | 第48页 |
| 3.3.9 发酵产物D-葡萄糖二酸和糖的分析检测 | 第48页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第48-58页 |
| 3.4.1 λ-red重组系统基因敲除 | 第48-51页 |
| 3.4.2 crispr/cas9试剂盒敲除 | 第51-52页 |
| 3.4.3 重组菌发酵 | 第52-57页 |
| 3.4.5 glk基因构建优化 | 第57-58页 |
| 3.5 本章小结 | 第58-60页 |
| 第四章 基于RNA水平调控对合成D-葡萄糖二酸的影响 | 第60-83页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 实验材料 | 第60-63页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第60-61页 |
| 4.2.2 培养基、引物、酶与实验试剂 | 第61-63页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第63页 |
| 4.3 实验方法 | 第63-68页 |
| 4.3.1 overlap PCR构建方法 | 第63-66页 |
| 4.3.2 质粒构建方法 | 第66页 |
| 4.3.3 重组大肠杆菌发酵 | 第66页 |
| 4.3.4 生物量检测方法 | 第66-67页 |
| 4.3.5 绿色荧光蛋白(eGFP)测定方法 | 第67页 |
| 4.3.6 pgi蛋白酶活测定方法 | 第67-68页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第68-82页 |
| 4.4.1 基因克隆与质粒构建 | 第68-72页 |
| 4.4.2 发酵液荧光测定 | 第72-75页 |
| 4.4.3 pgi蛋白酶活测定 | 第75-80页 |
| 4.4.4 逻辑开关优化后的发酵 | 第80-82页 |
| 4.5 本章小结 | 第82-83页 |
| 第五章 结论与建议 | 第83-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 附件 | 第98-99页 |