| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1 Cathepsins的研究进展 | 第16-22页 |
| 1.1.1 Cathepsins概述 | 第16页 |
| 1.1.2 Cathepsins的结构 | 第16-20页 |
| 1.1.3 Cathepsins的功能 | 第20-22页 |
| 1.2 昆虫Cathepsins的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.2.1 果蝇Cathepsins的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.2.2 棉铃虫组织蛋白酶研究 | 第23页 |
| 1.2.3 蚊子组织蛋白酶研究 | 第23页 |
| 1.2.4 家蚕组织蛋白酶研究进展 | 第23-26页 |
| 第二章 引言 | 第26-28页 |
| 2.1 研究背景 | 第26页 |
| 2.2 研究目的和意义 | 第26页 |
| 2.3 主要内容 | 第26-27页 |
| 2.4 技术路线 | 第27-28页 |
| 第三章 BmCat L鉴定克隆及生物信息学分析 | 第28-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 3.1.1 动物材料 | 第28页 |
| 3.1.2 在线工具来源 | 第28页 |
| 3.1.3 所用的分析软件 | 第28-29页 |
| 3.1.4 引物设计 | 第29页 |
| 3.1.5 主要实验仪器 | 第29-30页 |
| 3.1.6 主要试剂和耗材 | 第30页 |
| 3.1.7 主要试剂的配制 | 第30-31页 |
| 3.2 主要试验方法 | 第31-38页 |
| 3.2.1 家蚕组织总RNA的抽提 | 第31-32页 |
| 3.2.2 模板DNA的制备 | 第32页 |
| 3.2.3 c DNA模板的检测 | 第32-33页 |
| 3.2.4 BmCat L序列PCR扩增 | 第33页 |
| 3.2.5 BmCat L的回收 | 第33-34页 |
| 3.2.6 目的片段与载体的连接 | 第34页 |
| 3.2.7 目的片段的转化 | 第34页 |
| 3.2.8 阳性克隆的筛选和测序 | 第34页 |
| 3.2.9 RACE模板的制备 | 第34-36页 |
| 3.2.10 BmCat L 5’RACE和 3’RACE扩增 | 第36-37页 |
| 3.2.11 BmCat L的表达分析 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-44页 |
| 3.3.1 BmCat L的克隆及分析 | 第38-39页 |
| 3.3.2 BmCat L的序列分析 | 第39-40页 |
| 3.3.3 BmCat L的序列比对 | 第40-41页 |
| 3.3.4 BmCat L的进化分析 | 第41-42页 |
| 3.3.5 Cathepsin L蛋白结构多重比对分析 | 第42-43页 |
| 3.3.6 BmCat L表达特征分析 | 第43-44页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 BmCat L原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备 | 第46-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第46-49页 |
| 4.1.1 动物材料 | 第46页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第46页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第46-47页 |
| 4.1.4 主要试剂的配制 | 第47-49页 |
| 4.1.5 BmCat L重组蛋白表达引物 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-53页 |
| 4.2.1 BmCat L原核表达载体的构建 | 第49页 |
| 4.2.2 BmCat L诱导条件的摸索 | 第49-51页 |
| 4.2.3 BmCat L的纯化 | 第51页 |
| 4.2.4 BmCat L包涵体蛋白的复性 | 第51-52页 |
| 4.2.5 Anti-BmCat L抗体制备 | 第52页 |
| 4.2.6 BmCat L抗血清特异性及效价检测 | 第52-53页 |
| 4.2.7 免疫荧光 | 第53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-56页 |
| 4.3.1 BmCat L原核表达载体的构建及鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3.2 BmCat L原核诱导及蛋白纯化 | 第54-55页 |
| 4.3.3 BmCat L抗血清制备、效价及特异性检测 | 第55-56页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 BmCat L酶活性及稳定性测定 | 第58-66页 |
| 5.1 实验材料 | 第58-60页 |
| 5.1.1 动物材料 | 第58页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第58页 |
| 5.1.3 主要试剂耗材 | 第58-59页 |
| 5.1.4 主要试剂的配制 | 第59-60页 |
| 5.2 实验方法 | 第60-62页 |
| 5.2.1 家蚕血液组织蛋白酶提取物的制备 | 第60页 |
| 5.2.2 家蚕内源性组织蛋白酶活性测定 | 第60页 |
| 5.2.3 家蚕内源组织蛋白酶活性影响因素的研究 | 第60-61页 |
| 5.2.4 家蚕外源重组组织蛋白酶活性、热稳定性测定及影响因素检测 | 第61-62页 |
| 5.3 实验结果 | 第62-65页 |
| 5.3.1 家蚕内源组织蛋白酶酶活性、热耐受性及活性影响因素 | 第62-63页 |
| 5.3.2 BmCat L重组组织蛋白酶活性、热耐受性及活性影响因素 | 第63-65页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 家蚕Cathepsin L功能初探 | 第66-72页 |
| 6.1 实验材料 | 第66-67页 |
| 6.1.1 动物材料 | 第66页 |
| 6.1.2 相关数据库及分析软件 | 第66页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第66-67页 |
| 6.1.4 主要试剂耗材 | 第67页 |
| 6.1.5 相关定量引物 | 第67页 |
| 6.2 实验方法 | 第67-68页 |
| 6.2.1 蚕活体攻毒实验 | 第67页 |
| 6.2.2 BmCat L不同剪切体蛋白三级结构预测 | 第67-68页 |
| 6.3 实验结果 | 第68-70页 |
| 6.3.1 病原菌诱导BmCat L-S和BmCat L-L表达 | 第68-69页 |
| 6.3.2 BmCat L蛋白结构预测及结构数据库比对 | 第69-70页 |
| 6.4 小结与讨论 | 第70-72页 |
| 第七章 综合与讨论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
| 硕士期间发表文章及课题参研情况 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
