| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词表 | 第6-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-35页 |
| 1.1 诱导多能性干细胞的创建 | 第9-18页 |
| 1.1.1 干细胞概述 | 第9-10页 |
| 1.1.2 体细胞多能性重编程概述 | 第10-12页 |
| 1.1.3 体细胞诱导多能性重编程技术的建立和发展 | 第12-18页 |
| 1.2 诱导多能性干细胞诱导体系的优化 | 第18-24页 |
| 1.2.1 非整合型转基因诱导系统 | 第18-19页 |
| 1.2.2 可切除型转基因诱导系统 | 第19-20页 |
| 1.2.3 可调控外源基因表达诱导系统 | 第20页 |
| 1.2.4 非转基因诱导系统 | 第20-21页 |
| 1.2.5 小分子化合物对体细胞重编程的调控 | 第21-24页 |
| 1.3 诱导多能性干细胞的机制研究 | 第24-29页 |
| 1.3.1 体细胞多能性重编程中不同阶段的分析 | 第24-27页 |
| 1.3.2 体细胞多能性重编程模式假说 | 第27-29页 |
| 1.4 猪诱导多能性干细胞研究进展 | 第29-34页 |
| 1.4.1 猪及其它大动物诱导多能性干细胞的建立 | 第29-31页 |
| 1.4.2 猪诱导多能性干细胞的应用前景 | 第31-34页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 材料和方法 | 第35-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-42页 |
| 2.1.1 菌株及细胞系 | 第35页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第35页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第35-41页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第41-42页 |
| 2.2 实验方法 | 第42-58页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备及DNA转化 | 第42-43页 |
| 2.2.2 质粒DNA的提取 | 第43-44页 |
| 2.2.3 猪及小鼠胚胎成纤维细胞系的建立 | 第44-45页 |
| 2.2.4 饲养层细胞的制备 | 第45页 |
| 2.2.5 利用piggyBac和episome系统诱导产生猪iPS细胞及培养操作 | 第45-47页 |
| 2.2.6 猪iPS细胞的干性鉴定 | 第47-49页 |
| 2.2.7 猪iPS细胞DNA提取与鉴定 | 第49-50页 |
| 2.2.8 猪iPS细胞RNA提取、反转录与qPCR检测 | 第50-52页 |
| 2.2.9 猪iPS细胞的核型鉴定 | 第52页 |
| 2.2.10 猪iPS细胞内源干性基因甲基化测定 | 第52-54页 |
| 2.2.11 猪卵母细胞的采集、体外成熟与孤雌激活 | 第54-55页 |
| 2.2.12 猪体外受精囊胚的构建 | 第55-56页 |
| 2.2.13 猪成纤维细胞或者猪iPS细胞作为供体细胞的核移植操作 | 第56页 |
| 2.2.14 猪iPS细胞嵌合囊胚的制备 | 第56-57页 |
| 2.2.15 猪iPS细胞核移植胚胎或者嵌合胚胎体内移植操作 | 第57-58页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第58-104页 |
| 3.1 利用非病毒诱导系统创建猪iPS细胞及其多能性分析 | 第58-83页 |
| 3.1.1 利用episome瞬时表达载体诱导系统获得猪iPS细胞及其多能性分析 | 第58-68页 |
| 3.1.2 利用piggyBac转座子诱导系统获得猪iPS细胞及多能性鉴定 | 第68-75页 |
| 3.1.3 利用Cre/loxP诱导系统获得猪iPS细胞及其多能性分析 | 第75-78页 |
| 3.1.4 利用DOX调控诱导系统获得猪iPS细胞及其多能性分析 | 第78-80页 |
| 3.1.5 利用TMP调控诱导系统获得猪iPS细胞及其多能性分析 | 第80-83页 |
| 3.2 猪iPS细胞在体内的分化发育潜能研究 | 第83-93页 |
| 3.2.1 利用核移植操作技术进行iPS细胞克隆猪创建的尝试 | 第83-85页 |
| 3.2.2 利用胚胎注射技术进行iPS细胞嵌合体猪创建的尝试 | 第85-87页 |
| 3.2.3 利用胚胎聚合技术进行iPS细胞嵌合体猪创建的尝试 | 第87-93页 |
| 3.3 猪iPS细胞体内发育阻滞机制研究 | 第93-104页 |
| 3.3.1 猪iPS细胞及其重构胚的异常表观重编程研究 | 第93-98页 |
| 3.3.2 利用分化猪iPS细胞作为供体细胞进行核移植克隆猪的制备 | 第98-101页 |
| 3.3.3 猪iPS细胞转录组异常表达研究 | 第101-104页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第104-108页 |
| 4.1 外源基因的持续表达对于维持猪iPS细胞的多能性状态是不可或缺的 | 第104-105页 |
| 4.2 外源基因的持续表达导致猪iPS细胞的体内分化发育阻滞 | 第105页 |
| 4.3 嵌合体猪创建的失败表明猪iPS细胞并没有达到真正的多能性状态 | 第105-106页 |
| 4.4 克隆猪创建的失败表明猪iPS细胞的分化发育能力的缺失 | 第106页 |
| 4.5 猪iPS细胞及其核移植胚胎存在严重异常的表观重编程现象 | 第106-108页 |
| 第五章 结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-124页 |
| 附录 | 第124-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 个人简历 | 第129页 |
