| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1.1 前言 | 第13-14页 |
| 1.2 PPARA及miRNAS在肝脏中的研究概述 | 第14-24页 |
| 1.2.1 PPs研究概述 | 第14-16页 |
| 1.2.2 PPARA研究概述 | 第16-17页 |
| 1.2.3 miRNAs在肝脏中的研究概述 | 第17-24页 |
| 1.2.4 研究目的和意义 | 第24页 |
| 1.3 肝纤维化的研究概述 | 第24-33页 |
| 1.3.1 肝纤维化及HSCs的研究进展 | 第24-29页 |
| 1.3.2 EMT研究概述 | 第29-30页 |
| 1.3.3 Wnt信号通路研究概述 | 第30-32页 |
| 1.3.4 研究目的和意义 | 第32-33页 |
| 第2章 PPARA诱导miR-181a2表达减轻自身过度激活引起的肝细胞毒性 | 第33-84页 |
| 2.1 技术路线 | 第33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-39页 |
| 2.2.1 细胞和菌株 | 第33-34页 |
| 2.2.2 载体 | 第34-35页 |
| 2.2.3 主要试剂和试剂盒 | 第35-37页 |
| 2.2.4 主要仪器和设备 | 第37-38页 |
| 2.2.5 应用的分析软件和生物信息学网站 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-63页 |
| 2.3.1 载体构建 | 第39-44页 |
| 2.3.2 miRNAs模拟物片段序列 | 第44-45页 |
| 2.3.3 细胞培养 | 第45-46页 |
| 2.3.4 细胞转染 | 第46页 |
| 2.3.5 双荧光素酶报告基因检测 | 第46-47页 |
| 2.3.6 RNA提取、cDNA制备及荧光定量PCR分析 | 第47-51页 |
| 2.3.7 细胞总蛋白提取 | 第51页 |
| 2.3.8 蛋白浓度的测定 | 第51页 |
| 2.3.9 Westernblotting分析 | 第51-53页 |
| 2.3.10 EMSA实验 | 第53-58页 |
| 2.3.11 ChIP分析 | 第58-61页 |
| 2.3.12 ROS分析 | 第61-62页 |
| 2.3.13 TUNEL分析 | 第62页 |
| 2.3.14 统计分析 | 第62-63页 |
| 2.4 结果与分析 | 第63-80页 |
| 2.4.1 PPARA激动剂处理诱导miR-181a2表达 | 第63-66页 |
| 2.4.2 PPARA增强Hsa-miR-181a2启动子的转录活性 | 第66-69页 |
| 2.4.3 miR-181a-5p在多个细胞系中抑制PPARA的蛋白表达 | 第69页 |
| 2.4.4 过度激活PPARA引起细胞毒性 | 第69-75页 |
| 2.4.5 外源表达miR-181a-5p减轻PPARA过度激活引起的细胞毒性 | 第75-80页 |
| 2.5 讨论 | 第80-83页 |
| 2.5.1 miR-181a2的表达调控 | 第80页 |
| 2.5.2 PPARA诱导miR-181a2表达的分子机制 | 第80-81页 |
| 2.5.3 过度激活PPARA引起细胞毒性作用 | 第81-82页 |
| 2.5.4 miR-181a-5p降低PPARA过度激活引起的细胞毒性作用 | 第82页 |
| 2.5.5 PPARA与miR-181a2之间的反馈环路调节及其生理意义 | 第82-83页 |
| 2.6 小结 | 第83-84页 |
| 第3章 miR-126-5p靶向GSK3B调节肝星形细胞上皮-间质转化 | 第84-107页 |
| 3.1 技术路线 | 第84页 |
| 3.2 实验材料 | 第84-87页 |
| 3.2.1 细胞和菌株 | 第84-85页 |
| 3.2.2 载体 | 第85-86页 |
| 3.2.3 主要试剂和试剂盒 | 第86页 |
| 3.2.4 主要仪器和设备 | 第86页 |
| 3.2.5 应用的分析软件和生物信息学网站 | 第86-87页 |
| 3.3 实验方法 | 第87-91页 |
| 3.3.1 载体构建 | 第87-88页 |
| 3.3.2 miRNAs模拟物片段序列 | 第88页 |
| 3.3.3 双荧光素酶报告基因系统分析 | 第88-90页 |
| 3.3.4 RNA提取、cDNA制备及荧光定量PCR分析 | 第90页 |
| 3.3.5 细胞总蛋白提取 | 第90页 |
| 3.3.6 蛋白浓度的测定 | 第90页 |
| 3.3.7 Westernblotting分析 | 第90-91页 |
| 3.4 结果与分析 | 第91-103页 |
| 3.4.1 miR-126a-5p调控肝星形细胞激活和EMT | 第91-94页 |
| 3.4.2 ZEB1介导miR-126-5p诱导的肝星形细胞EMT | 第94-97页 |
| 3.4.3 miR-126-5p通过靶向GSK3B调控肝星形细胞EMT | 第97-101页 |
| 3.4.4 miR-126-5p以B-catenin依赖的方式诱导ZEB1表达 | 第101页 |
| 3.4.5 外源表达GSK3B抑制miR-126-5p诱导的EMT | 第101-103页 |
| 3.5 讨论 | 第103-106页 |
| 3.5.1 miR-126-5p调控肝星形细胞的上皮-间质转化 | 第103-104页 |
| 3.5.2 ZEB1介导了miR-126-5p诱导的肝星形细胞EMT | 第104页 |
| 3.5.3 miR-126-5p靶向调控GSK3B | 第104页 |
| 3.5.4 miR-126-5p以B-catenin依赖的方式诱导ZEB1表达 | 第104-105页 |
| 3.5.5 外源表达GSK3B抑制miR-126-5p诱导的EMT | 第105-106页 |
| 3.6 小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 发表文章 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
