| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第14-16页 |
| 1 文献综述 | 第16-34页 |
| 1.1 结核病的危害与流行特征 | 第16-17页 |
| 1.2 已用于结核病诊断的分子标识 | 第17-24页 |
| 1.2.1 基于细菌学的结核诊断标识 | 第18-19页 |
| 1.2.2 基于宿主反应的结核诊断标识 | 第19-24页 |
| 1.3 MicroRNAs与结核病免疫机制及诊断应用的相关性 | 第24-27页 |
| 1.3.1 MicroRNAs参与结核免疫反应 | 第25-26页 |
| 1.3.2 MicroRNAs对于结核诊断及治疗的应用价值 | 第26-27页 |
| 1.4 结核分枝杆菌诱导固有免疫 | 第27-32页 |
| 1.4.1 机体抗结核感染的固有免疫 | 第27页 |
| 1.4.2 NF-κB/MAPK信号转导途径 | 第27-30页 |
| 1.4.3 结核感染过程中主要细胞和细胞因子的作用 | 第30-31页 |
| 1.4.4 结核分枝杆菌Mce操纵子的功能 | 第31-32页 |
| 1.5 本研究目的与意义 | 第32-34页 |
| 2 肺结核病新型诊断标志物的筛选及鉴定 | 第34-67页 |
| 2.1 前言 | 第34-35页 |
| 2.2 实验材料 | 第35-40页 |
| 2.2.1 研究对象 | 第35页 |
| 2.2.2 临床样品分组 | 第35页 |
| 2.2.3 主要材料及试剂 | 第35-37页 |
| 2.2.4 主要溶液配制 | 第37-38页 |
| 2.2.5 主要实验仪器 | 第38-39页 |
| 2.2.6 引物的设计与合成 | 第39-40页 |
| 2.3 实验方法 | 第40-49页 |
| 2.3.1 样本采集和处理 | 第40页 |
| 2.3.2 双向凝胶电泳实验 | 第40-43页 |
| 2.3.3 胶图软件分析 | 第43页 |
| 2.3.4 质谱鉴定蛋白 | 第43-44页 |
| 2.3.5 Western blot验证差异蛋白的表达水平 | 第44-45页 |
| 2.3.6 荧光定量PCR检测基因mRNA和miRNA水平 | 第45-48页 |
| 2.3.7 分子生物学分析软件 | 第48-49页 |
| 2.3.8 数据分析 | 第49页 |
| 2.4 结果与分析 | 第49-60页 |
| 2.4.1 初治肺结核病人和健康人尿蛋白双向凝胶电泳 | 第49-50页 |
| 2.4.2 质谱鉴定差异蛋白点 | 第50-53页 |
| 2.4.3 MBL2,ITIH4-35k和RBP4可以作为早期肺结核的潜在候选标识 | 第53-55页 |
| 2.4.4 尿中mircroRNA-625-3p鉴别诊断涂片镜检阴/阳型肺结核 | 第55-57页 |
| 2.4.5 基于多元Logistic回归分析的初治肺结核危险因素筛选和风险预测模型建立 | 第57-60页 |
| 2.5 讨论 | 第60-67页 |
| 2.5.1 基于尿液样本的结核病诊断宿主标识 | 第60-61页 |
| 2.5.2 临床样本的选择和局限性 | 第61页 |
| 2.5.3 样品中高浓度无机盐对双向电泳的影响 | 第61-62页 |
| 2.5.4 尿中miRNA的浓度和纯度对RT-qPCR的影响及内参基因的选择 | 第62-63页 |
| 2.5.5 初治肺结核新型尿蛋白诊断标识分子 | 第63-65页 |
| 2.5.6 循环miRNA检测在结核诊断上的应用前景 | 第65页 |
| 2.5.7 MiRNA与蛋白质联合检测辅助临床肺结核的诊断 | 第65-67页 |
| 3 MiR-362-5p对结核分枝杆菌逃避宿主免疫反应调控作用的研究 | 第67-87页 |
| 3.1 前言 | 第67页 |
| 3.2 材料与方法 | 第67-76页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第67-71页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第71-75页 |
| 3.2.3 数据分析 | 第75-76页 |
| 3.3 结果与分析 | 第76-83页 |
| 3.3.1 多重PCR鉴定MTB | 第76页 |
| 3.3.2 MTB感染后miR-362-5p的表达显著下调 | 第76-77页 |
| 3.3.3 MiR-362-5p在结核病人PBMC中的下调表达 | 第77-78页 |
| 3.3.4 下调表达的MiR-362-5p抑制宿主炎症反应 | 第78-80页 |
| 3.3.5 下调表达的miR-362-5p与MTB吞噬和复制有关 | 第80-81页 |
| 3.3.6 MTB感染下调miR-362-5p的表达抑制NF-κB/p38 MAPK介导的巨噬细胞固有免疫反应 | 第81-83页 |
| 3.4 讨论 | 第83-87页 |
| 3.4.1 血液miRNA-362-5p与结核病发病相关性研究 | 第83页 |
| 3.4.2 下调表达的miRNA-362-5p抑制MTB诱导炎症反应 | 第83-85页 |
| 3.4.3 MiRNA-362-5p靶蛋白的预测 | 第85-87页 |
| 4 结核分枝杆菌蛋白YrbE3A正向调控宿主固有免疫的机制研究 | 第87-124页 |
| 4.1 前言 | 第87-88页 |
| 4.2 材料与方法 | 第88-101页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第88-90页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第90-100页 |
| 4.2.3 数据分析 | 第100-101页 |
| 4.3 结果与分析 | 第101-119页 |
| 4.3.1 Rv1964基因大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体的构建结果 | 第101-102页 |
| 4.3.2 Rv1964重组分枝杆菌的构建 | 第102-104页 |
| 4.3.3 MS_YrbE3A的诱导表达yrbE3A蛋白 | 第104页 |
| 4.3.4 YrbE3A重组分枝杆菌的生长特性 | 第104-106页 |
| 4.3.5 YrbE3A重组菌感染巨噬细胞中细菌的活菌数 | 第106-107页 |
| 4.3.6 YrbE3A促进炎性细胞因子的表达 | 第107-109页 |
| 4.3.7 YrbE3A通过激活NF-κB和MAPK信号通路调控炎性因子的分泌 | 第109-111页 |
| 4.3.8 YrbE3A重组耻垢分枝杆菌感染小鼠对肺组织重量和载菌量的影响 | 第111-113页 |
| 4.3.9 YrbE3A促进小鼠体内炎性细胞因子的分泌 | 第113-117页 |
| 4.3.10 YrbE3A增加小鼠肺组织的病理变化 | 第117-119页 |
| 4.4 讨论 | 第119-124页 |
| 4.4.1 结核分枝杆菌蛋白YrbE3A | 第119-121页 |
| 4.4.2 结核分枝杆菌YrbE3A蛋白参与激活固有免疫 | 第121-124页 |
| 结论 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-141页 |
| 致谢 | 第141-143页 |
| 附件1 | 第143-144页 |
